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Biochrom30+氨基酸分析仪蛋白水解图谱优化
一、 标样配置
氨基酸混合标准储备液：含有天冬氨酸、苏氨酸等17 种常见组成蛋白质的氨基酸。
17 种氨基酸标准品
行号 氨基酸 行号 氨基酸
1 Asp 天冬氨酸 2 Thr 苏氨酸
3 Ser 丝氨酸 4 Glu 谷氨酸
5 Pro 脯氨酸 6 Gly 甘氨酸
7 Ala 丙氨酸 8 Cys 胱氨酸
9 Val 缬氨酸 10 Met 蛋氨酸
11 Ile 异亮氨酸 12 Leu 亮氨酸
13 Tyr 酪氨酸 14 Phe 苯丙氨酸
15 His 组氨酸 16 Lys 赖氨酸
17 Arg 精氨酸 18
二、 分析方法描述（Biochrom 30+）
1) 色谱柱：Biochrom Na 型阳离子交换树脂柱，4.620cm
2) 运行时间：常规分析时间+再生时间56min
3) 反应单元温度：135C 。
4) 分离程序：
NO. Time Temp Buffer Pump Nin Rec Commands
1 01:00 48 1 35.0ml/h ON OFF
2 00:00 48 1 35.0ml/h ON OFF Reset
3 01:00 48 1 35.0ml/h ON OFF Load
4 06:40 48 1 35.0ml/h ON ON
5 13:00 52 2 35.0ml/h ON ON
6 01:00 52 5 35.0ml/h ON ON
7 16:00 95 5 35.0ml/h ON ON
8 04:00 95 6 35.0ml/h ON ON
9 04:00 95 1 35.0ml/h ON ON
10 09:00 48 1 43.0ml/h OFF OFF
11 02:00 48 1 35.0ml/h ON OFF
End
三、 蛋白水解图谱优化
四、 蛋白水解图谱优化原理及方法
Biochrom 30+系列提供的蛋白质水解产物程序可能需要稍做改动以达到在蛋白水解产物
标准中的最佳氨基酸分离，影响氨基酸分离的因素是：
缓冲液和有机溶剂的pH 值和克分子浓度
缓冲液时间
分析柱温度
缓冲液流速
树脂床长度
下列优化讨论和步骤是用于 Biochrom 30+系列氨基酸分析系统使用 Biochrom 生产或一
些常用缓冲液配方的：
缓冲液pH 值和克分子浓度 (The pH and Molarity of the buffers)
在离子交换层析中，使用不同pH 和克分子浓度的缓冲液是能分离氨基酸的。一般来说，
pH 或克分子浓度越高，氨基酸洗脱的越快。
为做蛋白质水解产物氨基酸层析，有三种缓冲液和一种再生溶液（0.04M 氢氧化钠）被
用在分步洗脱程序
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