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相关资料 关于基质金属蛋白酶 【关键词】 肠肿瘤；基质金属蛋白酶；肿瘤坏死因子受体 【摘要】 目的： 研究基质金属蛋白酶 9 （MMP9）对大肠癌细胞肿瘤坏死因 子受体 1（TNFR1）表达的影响以及促进大肠癌侵袭和转移的可能途径. 方法： 通过免疫荧光法研究 TNFR1 在大肠癌细胞 SW1116 中的表达；用MMP9 干预培 养的大肠癌 SW1116 细胞，用流式细胞术检测 MMP9 不同剂量和不同作用时间 时 TNFR1 表达变化. 结果：①SW1116 细胞表达 TNFR1; ②MMP9 对 SW1116 细胞表面 TNFR1 表达有下调作用，但有剂量和时间依赖性. 结论： MMP9 下 调大肠癌细胞表面 TNFR1 的表达，可能与大肠癌侵袭转移密切相关. 【关键词】肠肿瘤；基质金属蛋白酶；肿瘤坏死因子受体 0 引言 肿瘤坏死因子 (tumor necrosis factor, TNF)是一种主要由单核巨噬细 胞产生的多肽细胞因子，因其在内毒素处理后具有杀伤肿瘤细胞的作用而被 命名为肿瘤坏死因子. TNF 的生物学活性是通过存在于细胞表面的膜受体,即 肿瘤坏死因子受体 1(tumor necrosis factor receptor 1, TNFR1)和肿瘤坏死因子 受体 2(tumor necrosis factor receptor 2, TNFR2)介导. 体内外实验已证实肿瘤 坏死因子受体（tumor necrosis factor receptor, TNFR ）介导肿瘤坏死因子的肿 瘤杀伤作用，体内有多种免疫活性因子（干扰素、白介素等）即通过激活上 调 TNFR 以达到清除肿瘤的目的［1］,因而诱导并稳定肿瘤细胞膜 TNFR 对 机体抗肿瘤起非常重要的作用. 其他研究还证实大肠癌组织中存在基质金属 蛋白酶（matrix metalloproteinase ，MMPs ）高表达或活性增强现象. 某些活 service@100 性基质金属蛋白酶可能通过酶解作用促进肿瘤细胞膜 TNFR 的释放形成高水 平的可溶性肿瘤坏死因子受体［2 ］（soluble tumor necrosis factor receptor，sTNFR），是肿瘤细胞实现免疫逃逸的重要方式. 本研究通过检测 TNFR1 在肿瘤细胞膜的表达及 MMP9 对肿瘤细胞膜 TNFR1 表达的影响，探讨 MMP9 通过调节 TNFR1 促进大肠癌转移的可能机制. 1 材料和方法 1.1 材料 大肠癌细胞株（SW1116）由南方医院消化科实验室保存；小牛血清（杭 州四季青生物制品研究所）；RPMI1640 培养液，青、链双抗，2.5 g/L 胰酶Ｅ ＤＴＡ（广州威佳生物试剂公司）；鼠抗人 TNFR1 单克隆抗体（Santa Cruz 公司）；FITC 标记的羊抗鼠二抗（武汉博士德公司）；荧光素异硫氰酸盐（FITC） 标记的鼠抗人 TNFR1 单克隆抗体及重组人 MMP9 购自美国 R＆D 公司；FITC 标 记的鼠 IgG1 对照抗体（北京鼎国生物有限公司）. 1.2 主要仪器倒置、相差显微镜（Olympas 公司）；流式细胞仪（BECTON DICKINSON 公司）. 1.3 方法 1.3.1 细胞培养大肠癌 SW1116 细胞株为贴壁生长细胞. 用 RPMI1640 培 养基于 25 cm2 培养瓶,在 37℃，饱和湿度、50 mL/L CO2 培养箱中培养,培养 基中含 100 mL/L 小牛血清，青、链霉素各 100 U/mL. 汇片后弃培养液,用 2.5 g/L 胰酶ＥＤＴＡ消化细胞. 细胞接种于 25 cm2 培养瓶，每 3 d 传代一次. 1.3.2 细胞爬片及免疫荧光染色 SW1116 细胞用 2.5 g/L 胰蛋白酶消化， 用含 100 mL/L 小牛血清的 RPMI1640 培养液将细胞调成 5×104/mL 的细胞悬 service@100 液，接种于 24 孔板中，每孔预先置入 6 mm×6 mm 盖玻片一张，待细胞生长 状态良好时终止培养. 4 g/L 多聚甲醛固定爬片 30 min 后 0.1 mL/L PBS 冲 洗，用 10 mL/L Triton X100 处理 15 min 后正常羊血清 37℃孵育 30 min， 甩去血清