实验四.血凝与血凝抑制试验.ppt

实验四 血凝和血凝抑制试验（Hemagglutination and Hemagglutination Inhibition, HA and HI） 一、实验目的 二、实验原理 三、实验材料 四、实验步骤 五、结果判定 一、实验目的 了解血凝和血凝抑制试验的原理。 了解血凝价和血凝单位的概念。 掌握血凝和血凝抑制试验的操作步骤和结果判定的方法。 二、实验原理（一）血凝试验（HA） 一些病毒能够促使动物如鸡、鹅、豚鼠和人的红细胞发生凝集，叫做血凝试验。 病毒凝集红细胞是一种较为普遍的现象，可以作为鉴定病毒的一个指标。 血凝试验结果判定 一层RBC均匀铺在孔底者为++++； 基本同上，但边缘不整齐，有下坠倾向者为+++； RBC在孔底形成一个环状，四周有小凝集块者为++； RBC在孔底形成一个小团，但边缘不光滑，四周有小凝集块为+; RBC在孔底形成一个小团，边缘光滑，四周有似小凝集块者为±; 红细胞在孔底形成一个小团，边缘光滑，整齐者为-。 （二）血凝抑制试验（HI） 当病毒悬液中加入特异性抗体时，这种红细胞凝集的现象就被抑制，称红细胞凝集抑制试验，即血凝抑制试验。 因此，可以用已知病毒来检测被检血清中的相应抗体，也可以用已知血清来鉴定未知病毒。 三、实验材料 鸡新城疫病毒：鸡新城疫弱毒株（Lasota）接种鸡胚、收获尿囊液制备。 鸡红细胞：采集健康鸡血液，以阿氏液抗凝，以生理盐水洗涤3~5次，将血浆、白细胞等充分洗去，用生理盐水配置成1%红细胞悬液使用。 0.85%生理盐水。 被检血清，采自被检鸡的健康血清。 四、实验步骤（一）血凝试验（HA） 在血凝板第一排的1~12孔加入50μl生理盐水。 在第1孔中加入50μl病毒抗原，反复吸取混匀后吸50μl到第2孔，如此倍比稀释直到第10孔，混匀后弃50μl；最后两孔（11、12）为红细胞对照。 将1%的红细胞轻轻摇动混匀，在1~12孔中每孔加入50μl。 手工震荡，37℃静置25~30min后观察结果。 病毒液的血凝价是1:2？。 （二）血凝抑制试验（HI） 在血凝板的1~11孔加入25μl生理盐水，最后一孔（12孔）加50μl。 第1孔加待检血清25μl，混匀后吸25μl至第2孔，倍比稀释直至第10孔，混匀后弃25μl。 从1~11孔，每空加稀释好的25μl 4个血凝单位的病毒悬液。37 ℃静置25~30min 将1%的红细胞轻轻摇动混匀，在1~12孔中每孔加入50μl。 手工震荡，在37℃静置25~30min后观察结果。 结果判定：以红细胞凝集100%的抑制作为结果判定的终点。 血凝抑制价是1:2？，被检血清为阴/阳性。 五、结果判定 血凝价是1：？； 血凝抑制价是1：？； 被检血清为阴性还是阳性? * * 徐晓娟2011.10.31 HA试验的原理图 ++++ +++ ++ + - 1:21 1:22 1:23 1:24 1:25 1:26 1: 27 1: 28 1: 29 1: 210 C C 血凝价：能使红细胞产生50%凝集的病毒最高稀释度。 HA试验的原理图 HI试验的原理图 血凝价：能使红细胞产生50%凝集的病毒最高稀释度。 如果血凝价为1:28，那么4个血凝单位就是1:26 第11、12孔不加 第12孔不加 血凝价：能使红细胞产生50%凝集的病毒最高稀释度。 1个血凝单位：能使50%的红细胞发生凝集的病毒悬液。 病毒浓度 1:21 1:22 1:23 1:24 1:25 1:26 1: 27 1: 28 1: 29 1: 210 C C ≥1:24为阳性 ＜1:22为阴性 ＝1:23为可疑 血凝抑制价 第11孔为病毒对照，应该完全凝集，第12孔为细胞对照，应该完全沉积到孔底。 HA HI 细胞对照 *