大鼠脏器组织淋巴细胞分离方法幻灯片.pdf

大鼠脏器组织淋巴细胞分离方法 1. 实验前准备 2. 使用方法说明及图例 2.1 血液样本分离液使用说明及图例 2.2 组织分离液使用说明及图例 3. HES-TBD550使用说明 4. 组织单细胞悬液的制备 5. 注意事项 6. 性能指标 7. 生产企业 8. 参考文献 1. 实验前准备 A ． 试剂 大鼠脏器组织淋巴细胞分离液（货号：LTS1083P）、全血及组织稀释液、细胞洗涤 、羟乙基淀粉550、胎牛血清 B ． 器材 玻璃离心管、玻璃滴管 水平转子离心机、无菌工作台 2. 使用方法说明及图例 2.1 血液样本分离液使用说明及图例 A. 小量分离-使用1-2ml新鲜抗凝血（分离图例见图例1）： a. 取新鲜抗凝血1-2ml，与全血及组织稀释液（Cat#：2010C1119）1:1 混匀； b. 小心加于与混合 等体积的细胞分离液之液面上； c. 以400g（约1500转/分）离心15分钟(半径15cm水平转子)； 此时离心管中由上至下细胞分为四层。第一层；为血浆层。第二层；为环状乳白色淋 巴细胞层。第三层；为透明分离液层。第四层；为红细胞层。收集第二层细胞放入含4- 5ml细胞洗涤液（Cat#：2010X1118）的试管中，充分混匀后，以500g（约1800转/分）离心 20分钟，弃去上清留沉淀细胞重新悬起。重复洗涤2次即得所需细胞。 B. 中量分离-使用5-10ml新鲜抗凝血（分离图例见图例1）： a. 取新鲜抗凝血5-10ml，与全血及组织稀释液（Cat#：2010C1119）1:1 混匀； b. 将混合液小心叠加于细胞分离液之液面上 （混合液：分离液=2：1）； c. 以500g（约1800转/分）离心15分钟(半径15cm水平转子)； 此时离心管中由上至下细胞分为四层。第一层；为血浆层。第二层；为环状乳白色淋 巴细胞层。第三层；为透明分离液层。第四层；为红细胞层。收集第二层细胞放入含10ml 细胞洗涤液（Cat#：2010X1118）的试管中，充分混匀后，以500g（约1800转/分）离心20 分钟，弃去上清留沉淀细胞重新悬起。重复洗涤2次即得所需细胞。 C. 大量分离I-使用20ml新鲜抗凝血（分离图例见图例2）： a. 取新鲜抗凝血20ml以200g（约1100转/分）离心20分钟弃去血浆； b. 向弃去血浆的血细胞中加入全血及组织稀释液（Cat#：2010C1119）12ml 小心混匀； c. 将混合液小心叠加于细胞分离液之液面上 （混合液：分离液=2：1）； d. 以600g（约2000转/分）离心15分钟(半径15cm水平转子)； 此时离心管中由上至下细胞分为四层。第一层；为血浆层。第二层；为环状乳白色淋 巴细胞层。第三层；为透明分离液层。第四层；为红细胞层。收集第二层细胞放入含20ml 细胞洗涤液（Cat#：2010X1118）的试管中，充分混匀后，以500g（约1800转/分）离心20 分钟，弃去上清留沉淀细胞重新悬起。重复洗涤2次即得所需细胞。 D. 大量分离II-使用50ml新鲜抗凝血（分离图例见图例3）： a. 取新鲜抗凝血50ml与羟乙基淀粉550（HES- TBD550）液1:1混合后再与1份注射用生理盐水混匀20℃-30℃静置20- 30分钟。吸取混浊的上清 备用，弃去底部红细胞。 b. 将步骤1中留取的上清 以200g（约1100转/分）离心20分钟弃去上清保留沉淀细胞； c. 向沉淀的细胞中加入全血及组织稀释液（Cat#：2010C1119）20ml 小心混匀； d. 将混合液小心叠加于细胞分离液之液面上 （混合液：分离液=2：1）； e. 以600g（约2000转/分）离心15分钟(半径15cm水平转子)； 此时离心管中由上至下细胞分为四层。第一层；为血浆层。第二层；为环状乳白色淋 巴细胞层。第三层；为透明分离液层。第四层；为红细胞层。收集第二层细胞放入含20ml 细胞洗涤液（Cat#：2010X1118）的试管中，充分混匀后，以500g（约1800转/分）离心20 分钟，弃去上清留沉淀细胞重新悬起。重复洗涤2次即得所需淋巴细胞。 注：提取率大于90%。  血液（人）中各细胞含量参考值： 12