2种染色方法在微核试验中比较.pdf

蛛形学报Acta Arachnologica Sinica, Nov. 2008,17 （2）：124-128 ISSN 1005-9628 2 种染色方法在微核试验中的比较 * 李 锐 李生才 刘 佳 罗 原 山西农业大学农学院 太谷 030801 摘 要： DNA 存储着生物体赖以生存和繁衍的遗传信息，维护DNA 分子的完整性对细胞至关紧要。外界环 境和生物体内部的因素都会导致DNA 分子的损伤或改变，微核试验是检测外来化合物对染色体损伤作用的重 要方法，已在国内外普遍应用。蜘蛛是许多农、林害虫的天敌，在生物防治中起重要作用，保护和利用蜘蛛已成 为生物防治的一项重要内容。本文主要是通过2 种染色方法吉姆萨染色法和吖啶橙染色法对蜘蛛血细胞进行 微核试验，比较2 种染色方法的优劣。 关键词：星豹蛛；微核；DNA 损伤；吉姆萨染色法；吖啶橙染色法 前 言 星豹蛛Pardosa astrigera L. Koch 广泛分布于我省各地，主要活动于干旱地区。能捕食农田、果园 以及菜田等多种农作物害虫。它具有种群数量大，分布广，体型较大，捕食量大；成虫寿命长，繁殖力强， 游猎性等特点，是农作物害虫的主要捕食性天敌(李锐等，2007) 。 近年来人们对蜘蛛的研究有所加深，但对星豹蛛的DNA 损伤的研究较少。DNA 作为生命活动中最 重要的遗传物质，在维护机体的正常功能上有举足轻重的作用。由于DNA 结构特点及半保留复制特性， DNA 分子易出现损伤，引起细胞及机体损害。对DNA 损伤的修复，则是机体抵御各种伤害的基础。当细 胞中DNA 受到损伤时，会威胁基因组的完整性，对于这些损伤，由于DNA 结构微小，直接检测过于复杂 和困难（吕斌等，2002）。 微核（Micronuclei）简称（MCN）是真核类生物细胞中的一种异常结构，往往是细胞经辐射或化学药 物的作用而产生的（Fench M ，1997）。微核是细胞的染色体发生断裂后，细胞进入下一次分裂时，染色体 片段不能随有丝分裂进入子细胞，而在细胞浆中形成直径小于主核的、嗜色与主核一致、完全与主核分 开的圆形或椭圆形微小核（王昱等，2003）。位于细胞浆中独立于主核的核小体，其染色同主核，但比主核 淡，其直径小于主核1/3，主要由外界损害因素(生物、物理、化学)作用细胞后，导致细胞染色体丢失或断 裂，从而在胞浆中形成1 个或数个小核。微核的折光率及细胞化学反应性质和主核一样，也具合成DNA 的能力（余争平等，2000）。一般认为微核是由有丝分裂后期丧失丝粒的断片产生的（高雪等，2004）。微核 实验作为快速检测体内染色体畸变的方法，已广泛应用于遗传、食品、药物、环境等很多领域，并以其简 便、迅速、敏感为优点，广泛用于辐射损伤、工业管理、药物筛选以及血液学等工作的研究（曹佳，2000）。 吉姆萨（Giemsa）染色法：吉姆萨染液由天青，伊红组成。嗜酸性颗粒为碱性蛋白质，与酸性染料伊红 结合，染粉红色，称为嗜酸性物质；细胞核蛋白和淋巴细胞胞浆为酸性，与碱性染料美蓝或天青结合，染 紫蓝色，称为嗜碱性物质；中性颗粒呈等电状态与伊红和美蓝均可结合，染淡紫色，为中性物质。 吖啶橙（Acridine Orange ，AO）是1 种荧光色素，其检测激发滤光片波长488 nm ，阻断滤光片波长 515 nm。它与细胞中DNA 和RNA 结合量存在差别，可发出不同颜色的荧光，与DNA 结合量少发绿色 荧光，与RNA 结合量多发桔黄色或桔红色荧光。该染料具有膜通透性，能透过细胞膜，使核DNA 和 RNA 染色。因此，在荧光显微镜下观察，吖啶橙可透过正常细胞膜，使细胞核呈绿色或黄绿色均匀荧光； 而在凋亡细胞中，因染色质固缩或断裂为大小不等的片断，形成凋亡小体。吖啶橙使其染上致密浓染的 黄绿色荧光，或黄绿色碎片颗粒；而坏死细胞黄荧光减弱甚至消失。吖啶橙AO 常与溴化乙啶EB 合用双 染，因EB 只染死细胞使之产生桔黄色荧光，由此可区分出正常细胞、凋亡细胞及坏死细胞。吖啶橙染色 * 通迅作者（Correspond auther）, E-mail: sxaulisc@126.com 收稿日期（Received）:2008-08-08 山西省青年基金（2008021041）、山西省科技攻关项目（20080311023 ，2006031048）资助 Nov., 2008 李 锐等：2 种染色方法在微核试验中的比较