第6章 GAPDH抗体大全.doc

GAPDH抗体大全——总有一款合适的GAPDH抗体在Western Bloting实验中，可能存在总蛋白浓度测定不准确，或者蛋白质样品在电泳前上样时产生的样品间的操作误差；这些误差可以通过测定每个样品中实际转到膜上的内参，比如内参GAPDH的含量来进行校正。当然除了GAPDH抗体，β-Actin抗体、β-Tubulin抗体等也是最常见的内参抗体。GAPDH（甘油醛-3-磷酸脱氢酶）是参与糖酵解的一种关键酶，由4个30-40kDa的亚基组成，分子量146kDa，检测条带大约在36kDa。GAPDH基因几乎在所有组织中都高水平表达，广泛用作Western blot蛋白质标准化的内参。选择合适的GAPDH抗体显得尤为重要，首先GAPDH的WB检测条带大约为36kDa，因此对于一些待检测分子量大于40kDa或者小于30kDa的目的蛋白尤为合适。一般来说，国产的抗体在质量稳定性、效价等方面存在不足，但是进口品牌如Abcam、Millipore、CST等价格偏高，一般在￥3000/100ul左右。下面我们为您推荐三款GAPDH原装进口抗体，分别是美国EarthOx和ProteinTech的产品。EarthOx的Anti-GAPDH Monoclonal Antibody（货号E021010）是小鼠源的单抗，其效价很高，厂商推荐的WB起始稀释比率为1:1000，实际应用过程中，有使用1:10000或更高的报告，远远高于此稀释比率，说明其免疫效价很高，另外，其检测种属也很多，包括人、牛、猪、小鼠、大鼠等。右图为EarthOx的Anti-GAPDH Monoclonal Antibody（货号E021010）在不同细胞系内WB的检测结果。货号 品牌 品名 来源 应用类型 特点 说明书 E021010 EarthOx Anti-GAPDH Monoclonal Antibody 小鼠 WB, IF 效价极高，检测种属多 点击 10494-1-AP ProteinTech GAPDH Polyclonal Antibody 兔 WB, ELISA 兔源 点击 60004-1-Ig ProteinTech GAPDH Monoclonal Antibody 小鼠 WB, ELISA, IHC, IF 应用类型多 点击 ProteinTech的GAPDH Polyclonal Antibody（货号10494-1-AP）则是一款兔源多克隆GAPDH抗体，对于需要兔源GAPDH抗体的客户则是一个不错的选择。同样，ProteinTech的GAPDH Monoclonal Antibody（货号60004-1-Ig）则是另一款单克隆抗体，除了WB和IF外，还可以应用于免疫组化IHC等实验。需要注意的是IF也是GAPDH抗体常用的应用类型之一。左图为ProteinTech的GAPDH Monoclonal Antibody（货号60004-1-Ig）抗体在石蜡包埋、福尔马林固定的切片上的应用。更多GAPDH内参抗体以及其他如Actin、Tubulin等其他内参抗体，请电话垂询。美国EarthOx品牌是一 家提供高性价比免疫学和细胞学科研产品及解决方案的品牌，***捷将其引入中国，作为其中国区域代理，将为客户提供最具性价比的常规免疫学试剂，如各种标签抗体、内参抗体、常规一抗以及全系列二抗，抗体检测底物以及相关试剂盒等。同时我们作为多家国际知名品牌的的中国代理或区域代理，能为您提供系列的实验室解决方案。如果您对上述产品感兴趣，请致电027***捷科技有限公司垂询相关的产品信息及完整实验解决方案。Western Blot 内参选择 发布日期：[2008-5-17]??? 共阅[11724]次 Western?Blot? ? ? 要检测一个基因的表达产物是否正确，或者比较表达产物量的相对变化，首选方法是Western Blot。因为Western Blot操作相对简单方便，既可以定性分析表达产物，同时还可以指示目的蛋白量的相对变化。虽然，顺利的时候Western Blot做起来很简单，可不顺的时候也很令人心烦――做不出结果啦、假阳性啦、结果出现多条带啦、到底是一抗有问题还是二抗有问题啦……毕竟，作为一种有活性的生物大分子，抗体和抗原的反应毕竟不象1+1那么明确，而用这种不确定的试剂来测定同样知之甚少的表达产物，确实是有一定的不确定性的。所以，严谨的Western Blot实验设计中要求有良好的参照体系，对实验结果分析是非常有用。特别是当实验出现问题时，借助参照体系很容易就可以查出问题所在，而不必抓耳挠腮怨天尤人。良好的参照体系通常包括分子量Marker（用来确定蛋白条带对应的分子量大小）、