第五章-酶.ppt

抑制类型 特点 不可逆抑制 可逆抑制 竞争性抑制 非竞争性抑制 结构 多样 与底物相似 与底物不同 与酶的结合部位 活性中心必需基团 活性中心 活性中心外部位 结合方式 共价结合 非共价结合 非共价结合 消除抑制的方法 化学法 透析，超滤 增大底物浓度 透析，超滤 动力学特点 无 Vmax不变 Km增大 Vmax减小 Km不变 表5-3 酶的抑制类型 常见抑制剂有以下几种: 这类抑制剂与酶活性中心必需基团以共价键结合，引起酶活性丧失，由于抑制剂与酶结合紧密，故不能用透析、超过滤等物理方法去除 1.不可逆抑制 有机磷农药：专一作用于丝氨酸羟基 有机汞:专一作用于巯基 砷化物，氰化物CN－，Pb2+ 烷化剂、酰化剂:可作用于不同酶,专一性低 可逆抑制分为两种类型：竞争性抑制和非竞争性抑制 这类抑制剂与酶蛋白以非共价键结合，具有可逆性，可用透析、超过滤等物理方法去除 2.可逆抑制 ①竞争性抑制 抑制剂的特点 这种抑制作用的强弱取决于抑制剂于底物的比例，故除透析法外，还可以用增大底物浓度的方法来消除 抑制剂( I )的结构与底物极为相似，可与酶活性中心结合，降低酶活性。 抑制剂与底物相互竞争与酶活性中心结合，当抑制剂与酶结合成EI复合体后，底物就不能再与酶结合，反之底物先与酶结合成ES复合体后，抑制剂也不能与酶结合。 竞争性抑制剂可用于药物的设计和开发 有抑制剂 竞争性抑制双倒数曲线方程作图为 正常 1/Vmax 1 〔S〕 v 1 - Km 1 - Km′ 1 ②非竞争性抑制 非竞争抑制剂与底物结构不相似.因此不能用增加底物浓度的方法来消除，只能用透析，超过滤法除去 抑制剂的特点 抑制剂与底物的结构不相似,抑制剂和底物分别结合在酶的不同部位上，抑制剂通常与活性中心外部位结合。 酶可以同时和底物及抑制剂结合，两者没有竞争作用。不管抑制剂与酶先结合还是后结合，只要抑制剂与酶结合后，酶-底物复合物就不能得到产物 非竞争性抑制双倒数曲线方程如下 正常 - Km 1 1 〔S〕 v 1 1/Vmax 有抑制剂 1/Vmax′ 一.酶活力及其测定 三.酶活性中心转换数 二.酶活力单位 四.酶活力的测定方法 一.酶活力及其测定 酶的定性和定量不同于一般化学物质,不能用重量和体积来表示。酶的定量通常用酶活力来表示 酶催化一定化学反应的能力称为酶活力 酶活力通常以一定条件下，酶所催化的反应速度来确定.测定酶活力也就是测定酶催化的反应速度。单位为浓度/时间 定义 通常有以下两种方法测定酶活力：1.测定一定时间内的化学反应的量 2.测定完成一定量反应所需的时间 1.测定一定时间内的化学反应的量 在一定时间内，可测定被酶作用的底物的减少量或产物生成的量来确定反应速度 但因为在反应时底物总是过量的，底物的减少占很少一部分，不易分析测准。而产物是从无到有，比较容易测量准确.所以通常是测定产物的量来代表反应速度。 不同的酶维持初速度的时间不一样，应在此时间内测定初速度.如脲酶维持初速度的时间为0～30分钟,乳酸脱氢酶为0～30秒钟 通过产物的量来测定反应速度时应以测反应的初速度为准 要点 由图可看出，产物的反应生成速度只在最初一段时间内保持恒定，随时间延长，速度逐渐下降 斜率：浓度/时间 =v 其原因有底物浓度的降低，产物对酶的抑制，逆反应增加，酶部分失活等。 反应时间 （酪氨酸） 产物浓度 例 蛋白酶的活力测定：根据酪蛋白被酶水解生成的酪氨酸的量来确定.产物浓度的速度曲线如图： 通常测定一定量反应物的完全消耗或一定量产物生成所需的时间 以一定量的淀粉完全反应，与碘不生成兰色时所需时间来确定 2.测定完成一定量反应所需的时间 例 液化淀粉酶的活力测定 ： 二.酶活力单位 酶活力的高低是用酶活力单位(U)来表示的，所谓酶活力单位是根据某种酶在最适条件下，单位时间内被酶作用的底物减少量或产物生成量来规定的 酶活力单位有以下几种标准 α-淀粉酶：在最适条件下，每小时催化1克淀粉液化所需的酶量为一个活力单位(U) 蛋白酶：在最适条件下，每分钟分解酪蛋白产生1微克酪氨酸的酶量称为一个活力单位(U) 3.习惯单位 4.酶的比活力 酶的比活力是指每毫克酶蛋白(或蛋白氮)所含的酶活力单位数 比活力 = 总活力单位数 毫克酶蛋白(氮) 称取10mg α-淀粉酶粉配成250ml酶溶液，从中取出0.1ml酶液，得知10分钟分解0.5g淀粉。根据以上数据，求:1ml酶液中所含活力单位数 问题 α-淀粉酶：在最适条件下，每小时催化1克淀粉液化所需的酶量为一个活力单位(U) 1ml酶液活力单位数 = 3×10 = 30 U 0.1ml酶液活力单位数 = 0.5×60 10 = 3