第十章 高效液相色谱法.ppt

超声脱气 进样操作：load时，注入样品扳至Inject约1min后，扳回load，拔针 课堂练习 5、在液相色谱中，常用作固定相，又可用作键合相基体的物质是（ ） A、分子筛 C、氧化铝 D、活性炭 B、硅胶 答错了，再来一次 答对了，点击此处进入下一题 课堂练习 6、用十八烷基硅烷键合硅胶柱分离一有机弱酸混合物样品，以甲醇-水为流动相时，样品容量因子较小，若想使容量因子适当增加，较好的方法是（ ） A、增加流动相中甲醇比列 C、流动相中加入少量的醋酸 B、增加流动相中水的比例 D、流动相中加入少量的氨水 答错了，再来一次 答对了，点击此处进入下一题 课堂练习 7、在反相键合色谱法中固定相与流动相的极性关系是（ ） A、固定相的极性流动相的极性 C、固定相的极性=流动相的极性 D、不一定，视组分性质而定的 B、固定相的极性流动相的极性 答错了， 再来一次 答对了，点击此处进入下一题 课堂练习 8、下列那种因素将使组分的保留时间变短？ A、减慢流动相的流速 D、正相色谱流动相为正己烷-二氯甲烷，增大正己烷比例 B、增加色谱柱柱长 C、反相色谱流动相为乙腈-水，增加乙腈比例 答错了，再来一次 答对了，点击此处进入下一题 课堂练习 9、在反相键合相色谱中，流动相常用（ ） A、烷烃加醇类 C、水 D、缓冲盐溶液 B、甲醇-水 答错了，再来一次 答对了，点击此处进入下一题 课堂练习 10、在液相色谱中，以缓冲液为流动相的是（ ） D、液-固吸附色谱 C、化学键合相色谱 B、凝胶色谱 A、离子交换色谱 答错了，再来一次 答对了，OVER！ 　1、手柄位进样(Load)位置时，样品经微量进样针从进样孔注射进定量环，定量环充满后，多余样品从放空孔排出；　　2、将手柄转动至进样(Inject)位置时，阀与液相流路接通，由泵输送的流动相冲洗定量环，推动样品进入液相分析柱进行分析。 三、分离系统 色谱柱是高效液相色谱仪的重要部件，由柱管和固定相组成 按主要用途可分为分析型色谱柱和制备型色谱柱 ； 四、检测系统 高效液相色谱仪中的检测器是通过将组分的量转变成为电信号； 检测器应具备灵敏度高、响应对流动相流量及温度变化都不敏感、死体积小、线性范围宽、适用范围广、重现性好的特点。 四、检测系统 常用的检测器有 紫外吸收检测器（UVD） 蒸发光散射检测器（ELSD） 示差折光检测器（RID） 荧光检测器（FLD） 电导检测器（ECD） 质谱检测器（MSD） 紫外吸收检测器（UVD） 紫外检测器是使用最广泛的一种检测器 特点：灵敏度较高，噪声低，检出限小，适合分析有紫外吸收的物质； 为浓度型检测器；选择性检测器，仅对有紫外吸收的物质有响应； 可用于制备，或与其它检测器串联使用； 对温度和流动相流量波动不敏感，可用于梯度洗脱 。 紫外吸收检测器（UVD） UVD有三种类型：固定波长型、可变波长型及二极管阵列检测器。 目前使用最多的是可变波长型及二极管阵列检测器。 图10-8 流通池示意图 可变波长型紫外检测器 可变波长型紫外检测器是目前高效液相色谱仪中配置最多的检测器，采用氘灯作光源，波长 在190～600nm范围内可连续调节。其结构与一般的紫外分光光度计一致，主要差别是用流通池代替吸收池。 二极管阵列检测器 三维色谱-光谱图 （二）蒸发光散射检测器（ELSD） ELSD一般都是由三部分组成，即雾化器、加热漂移管和光散射池 主要用于糖类、高分子化合物、高级脂肪酸以及甾体类等几十类化合物 （三）示差折光检测器（RID） 特点：通用性强，适用于具有与流动相折射率不同的样品组分，但是灵敏度低，也不能用于梯度洗脱。通常只用于糖类化合物的检测。 （四）荧光检测器（FLD） 特点:灵敏度高，检测限可达到10-10g·ml-1，选择性好，样品用量少 应用：具有荧光的有机化合物（如多环芳烃、氨基酸、胺类、维生素和某些蛋白质等），都可用荧光检测法检测。 （五）电导检测器（ECD） 电导检测器是根据电化学原理和物质的电化学性质进行检测的 特点:灵敏度高、专属性高 应用:主要应用于复杂样品中痕量组分的选择测定，亦即较复杂生物样品中药物和其代谢物的测定 (六)质谱（MS） 质谱将化合物打碎成离子和碎片离子，按其质荷比的不同进行分离测定。 质谱是强有力的结构解析工具之一，它的应用范围广、灵敏度高、分析速度快，但仪器和实验成本很高，在一般性的实验中不太适宜。 §10-2 高效液相色谱的类型 一、液固吸附色谱 二、液-液分配色谱 三、化