基于PCR方法对载体pBluescriptⅡSK(+)及pCAMBⅠA1300的定点突变.pdfVIP

^ ● C T 3·87 ●卟ICULTUR^E华北农学报·2016，31(6)：8 B¨HLI-S啊I咖 IA1300的定点突变 及pCAMB 蒲 艳，刘 超，林 琪，李继洋，刘晓东 (新疆农业大学农学院，农业生物技术重点实验室，新疆乌鲁木齐830052) II I A1300多克隆位点内相 摘要：运用PCR定点突变技术对载体pBluescriptSK(+)以及植物表达载体pCAMB 关的酶切位点进行改造，为运用CRISPR／Cas9基因编辑载体在构建敲除体系时提供更多便捷可用的酶切位点。通过 II I、EcoRV、SmaI、SacⅡ4个酶切位 酶切鉴定以及测序表明，成功将pBluescriptSK(+)载体多克隆位点内姗o I I、SalI以2个 点，分别改造为Ⅳk I、MiI、PacI；将pCAMBA1300植物表达载体多克隆位点内的Sac I、Mfe 酶切位点分别改造为NsiI、PacI，为今后构建CRISPR／Cas9基因组编辑载体及对植物功能基因进行精准定位研究 奠定一定的理论基础。 II I A1300；定点突变；PCR 关键词：pBluescriptSK(+)；pCAMB 中图分类号：Q78 文献标识码：A 文章编号：1000—7091(2016)06—0083—05 doi：10．7668／hbnxb．2016．06．013 Site-directed of lI MutagenesispBluescriptSK(+)and IA1300VectorsBasedonPCRMethod pCAMB PU Yan，LIUChao，LIN Qi，LIJiyang，LIUXiaodong of of (College AgricuhuralUniversity，KeyLaboratoryAgricuhural Agronomy，Xinjiang 830052，China) BiologicalTechnology，Urumqi fortheconstructionof orderto moreconvenientandefficientrestriction site Abstract：Inprovide enzyme CRISPR／Cas9 inthe clonesiteof II I geneeditingsystem future，themultiple pBluescriptSK(+)andpCAMB A1300vectorsweremodified．DNAshowedthatsite-directed were sequences mutagenesissuccessfullyi