肿瘤靶向性纳米转运载体研究(张振中).ppt

现有教职工86人，其中高级职称43人，具有博士学位的教师42人，有双聘院士1人、国家有突出贡献专家1人，省特聘教授3人，另外聘请20余名国内外知名专家为兼职教授。学院设有药学和药物制剂两个专业，拥有一级药学硕士学位授予权、药物化学博士点和药学博士后流动站。药物关键制备技术省部共建教育部重点实验室、 靶向hTERT的肝特异性RNAi载体的构建与鉴定 研究内容 靶向hTERT基因的siRNA的序列筛选 双基因沉默载体的构建与鉴定 肝靶向apoA-I启动子的活性修饰 肝特异性shRNA干扰载体系统的构建与鉴定 双基因沉默载体的构建与鉴定 MTT检测结果 载体pDA-shA-T2的酶切测序结果 RT-PCR结果 Western-blot结果 肝靶向apoA-I启动子的活性修饰 实验流程 pEA-CMV载体的酶切测序结果 pEA-SV40载体的酶切测序结果 GFP荧光表达检测和RT-PCR结果 肝特异性shRNA干扰载体系统的构建与鉴定 实验流程 载体pDA-shA-T2-CMV的酶切测序结果 RT-PCR结果 Tf-PLD制备 原子力显微镜观察PILP的形态(如图)发现：PILP形态规则，近球形。 PILP 的抗酶切实验 8314/EGFP/PILP 在 SMMC-7721 中的表达 PILP介导的体内基因表达结果 转运载体的构建 设计新型载体材料如糖簇分子，壳聚糖改性分子。降低表面电荷，减少毒性。 壳聚糖 合成反应式 红外图谱 靶向缩合体的设计 设计靶向配体—NGR或RGD多肽能与 缩合体结合形成具有肿瘤靶向性的“复合型”缩合体。 原子力显微镜下复合物平面图 原子力显微镜下复合物立体图 胆固醇甲酰-壳聚糖共聚物冬凌草甲素胶束的制备及其细胞 动力学研究 冬凌草甲素 冬凌草甲素（Oridorin，ORI）不易溶于水，可溶于甲醇、乙醇、乙醚等有 机溶剂中。 具有较强的抗肿瘤活性，对多种肿瘤细胞都有明显的杀伤与抑制作用。 药理学应用 医用生物材料 药物载体  两性接枝段共聚物CF-CS-CM的合成研究 2、合成反应 1、壳聚糖的纯化 3、分离纯化 4、鉴定 酸溶碱沉——真空干燥 混合溶剂、磁力搅拌、催化剂 透析——过硅胶柱 ——减压蒸发 IR、1H-NMR、13C-NMR 四步操作 * * * * 肿瘤靶向性纳米转运载体研究 张振中 教授 郑州大学药学院 河北省石家庄 30/09/2010 靶向性 转染效率 持续性 “基因治疗” ?基因治疗?相关文献总量年度变化图 2008年：2071篇（截止到2008/9/1，PubMed） 活性 修饰 RNAi表达系统 协同基因 沉默 hTERT、hEGFR 协同下调 肝特异 性启动子 靶向hTERT的肝特异性RNAi表达载体系统 CMV、SV40增强子修饰，增强启动子转录活性 apoA-I启动子 载体pDA-shA-T2的酶切测序结果 1 DNA Marker 2. pDA-EGFP : VspI/XbaI 3. pDA-shA-T2: VspI/XbaI 300bp 250bp 1. pDA-shA-T2;.2. pDA-EGFP; 3. pDA-shA-G4,pDA-shA-T2 1. pDA-shA-G4,pDA-shA-T2;2. pDA-shA-T2; 3. pDA-EGFP 增强子 修饰 修饰方式 基因 突变 基因调控 元件调控 同阴性对照pEA分别 转染肝癌细胞SMMC-7721 pEA-CMV 载体的构建 pEA-SV40 载体的构建 绿色荧光蛋白、RT-PCR 1. DNA Marker;.2. pEA-CMV: NheI; 3. pEA : NheI 1000bp 4600bp 4100bp 1.pEA : NheI;.2. pEA-SV40: NheI; 3. DNA Marker 800bp 700bp 5000bp 4100bp 4600bp 1. pEA; 2. pEA-CMV; 3. pEA-SV40 1. pEA-SV40; 2. pEA-CMV; 3. pEA apoA-I 启动子 CMV增强子活性修饰 Ribozyme MAZ结构 shRNAT2 肝特异性RNAi 表达系统 RT-PCR 转染肝癌细胞 SMMC-7721 载体 pDA-shA- T2-CMV 的构建 1. pDA-shA-T2 : Bgl II;.2. pDA-shA-T2-CMV: Bgl II; 3. DNA Marker 6000bp 5000bp 1. pDA-shA-T2;.2. pDA-EGFP; 3. pDA-shA-T2-CMV 利用抗体、细胞膜表面受体的专一性作用，将配