色谱分析技术.ppt

（1）硅胶：极性吸附剂，应用范围广 物理吸附为主，氢键吸附为辅 微酸性，不直接用于碱性成分的分离 机械强度好，适用于薄层色谱 吸附容量大，与羟基数目有关 常用硅胶的规格：硅胶H，硅胶G，硅胶GF254等 （2）氧化铝：a.极性吸附剂，较硅胶强。 b.物理吸附为主，氢键吸附为辅 c.微碱性，不直接用于酸类成分的分离 取本品水蜜丸6g，研碎，或取小蜜丸或大蜜丸9g，切碎，加硅藻土4g，研匀。加乙醚40ml，低温回流1小时，滤过，滤液挥去乙醚，残渣加丙酮1ml使溶解，作为供试品溶液。另取丹皮酚对照品，加丙酮制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(附录Ⅵ B)试验，吸取上述两种溶液各10μl,分别点于同一硅胶Ｇ薄层板上，以环己烷－醋酸乙酯(3:1) 为展开剂，展开，取出，晾干，喷以盐酸酸性 5％三氯化铁乙醇溶液，加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同的蓝褐色斑点。 （2005年版《中国药典》一部 401页） （1）软板的制备 软板：直接将吸附剂铺在玻璃板上制成，不加粘合剂 3.橡皮膏 4.橡皮管 要求：厚度→随分离要求而定，一般0.25～0.5mm 玻璃棒推动速度不宜过快、也不应停顿→影响厚度均一性 优点：方法简便、随用随铺、展开速度快。 缺点：吸附剂易脱落、只能用近水平展开，效果差。 薄层板分类和制法 软板的制备 硬板的制备 倾注法 平铺法 机械涂布法 1、薄层板的制备 （2）硬板的制备 硬板：吸附剂加粘合剂制成的板 常用的粘合剂：煅石膏（Ｇ） 机械强度差，易脱落，但不易腐蚀 　　　　　　　羧甲基纤维素钠（CMC-Na） 机械强度好，不易脱落，但易腐蚀且 a、倾注法： 硅胶G或氧化铝G，直接加水调成糊状 硅胶或氧化铝，加羧甲基纤维素钠水溶液调成糊状 倒在玻璃板上 均匀铺开、振荡、晾干、活化、置干燥器中备用。 （2）硬板的制备 b、平铺法： 1. 吸附剂薄层 2. 涂布器 3. 玻璃夹板 4. 玻璃板 5. 玻璃夹板 过程：制板→振荡→晾干→活化→备用 优点：一次铺多块薄层板，简单易行。 （2）硬板的制备 c、机械涂布法： 优点：简单方便、薄板厚度均匀、分离效果好。 手动涂布器 全自动涂布器 常用的薄层板： 软板：硅胶H板、氧化铝H板 硬板：常用的有硅胶G板、氧化铝G板、硅胶CMC-Na板、氧化铝CMC-Na板、硅胶GF[254] 、硅胶GF[356] 2、点样 （1）样品溶液的制备： 怎样选择溶剂？ 水可以用吗？ 2、点样 （2）点样量： 与薄层板的关系 太多太少的影响 点样基线：距底边2.0cm 样点直径：2-4mm 点间距离：1.5-2.0cm 2、点样 （3）点样方法： 划线、样品记号点、点样 注：动作要轻， 毛细管或点样器不能混用， 斑点大小适当，可多次点样。 平头50ul微量点样器 全自动点样仪 3、展开 展开缸（色谱缸） 3、展开 （1）展开方式： a、近水平展开 特点：速度快、适用于软板的展开。 3、展开 （1）展开方式： b、上行展开 过程：预饱和（滤纸贴于展开槽内侧）、展开、标记溶剂前沿 c、单向二次展开 d、双向二次展开 3、展开 （1）展开方式： 萜的各类含 氧衍生物 极性较小的展开剂 极性较大的展开剂 原点：含氧衍生物 萜烯类 含氧衍生物 3、展开 （2）注意事项： a、色谱槽需密闭良好 脂溶性展开剂：甘油淀粉糊 水溶性展开剂：凡士林 b、注意防止边缘效应 4、显色和定位 一般规律：日光下观察、紫外灯下观察、加显色剂 加显色剂：多喷雾，软板使用浸渍显色法 紫外灯观察 喷显色剂观察 5、薄层扫描仪对色谱斑点进行扫描 用一束长宽可以调节的一定波长、一定强度的光照射到薄层斑点上进行整个斑点的扫描，用仪器测量通过斑点或被斑点反射的光束强度的变化从而达到定量的目的。? 判断依据：Rf值、Rs值 1、查找资料：影响Rf值的因素 吸附剂种类、活度、颗粒大小；展开剂纯度和极性；薄层厚度；点样量；展开方式、温湿度；展开槽中的预饱和状态等。 2、对照品比较法：常用。 四、结果计算和判断 （一）定性鉴别 1、对照品比较法： 杂质对照品制成一定浓度的溶液 样品制成一定浓度溶液 按相同的点样量点样 展开后观察