药物分析 第9章 甾体激素类药物的分析.ppt

515 第二步反应 465 450 500 550nm A Kober 反应吸收光谱 第一步反应 采用本法测定炔雌醇片及复方炔诺酮片、复方炔诺孕酮滴丸、复方左炔诺孕酮片中的炔雌醇的含量 中国药典 含量测定 特点 用样量少，灵敏度高，分离效果好，快速 RP－HPLC 各国药典常采用 可消除其他甾体的干扰 《中国药典》2005年版 内标法 + 校正因子 填充剂 C18 流动相 甲醇-水（70：30） 醋酸地塞米松内标 甲睾酮 炔雌醇内标 醋酸甲地孕酮 黄体酮内标 己烯雌酚 丙酸睾酮及其注射液 内标 苯丙酸诺龙 醋酸地塞米松片 UV法 皮质激素 雄性激素和蛋白同化激素 孕激素 △４-3-酮 240nm（±） 苯环 280nm（±） 雌激素 醋酸地塞米松注射液 四氮唑比色法 常用的四氮唑盐 I. 氯化三苯四氮唑（TTC） 也称红四氮唑（RT） 深红↓ II. 蓝四氮唑（BT） 暗蓝 √ 皮质激素C17- ? -醇酮基具有还原性，在强碱性溶液中能 将四氮唑盐定量地 还原为有色甲瓒。 1、原理 三苯甲瓒 氯化三苯四氮唑 （TTC） [H] ↓深红 2,3,5-Triphenyltatrazolium chloride Red tatrazoline RT (Formazan) 对照品法 2、测定方法 40～45′ 暗 3、测定条件 （1）基团影响： 一般认为：C11上的酮基反应速度快于C11位上的羟基，C21上的羟基酯化后较其母体羟基的反应速度慢；当酯化了的基团为三甲基醋酸酯时，反应速度更慢。 （2）O2与光线 O2敏感 → 充N2 光敏感 → 避光、快速 反应过程 反应产物 ChP 充N2、暗处、快速 含水量＞5% → v↓ 醛（还原性）→ A↑ 含水10% → A↓10% 含水30% → 几无反应 （3）溶剂与水 无醛 乙醇 无水 （4）碱的种类及加入顺序 皮质激素与碱长时间接触会发生副反 应，故应先加四氮唑盐后再加入碱液 供试液 ＋ 四氮唑盐 ＋ 碱试液 氢氧化四甲基铵 （pH13.75） （5）温度与时间 t℃↑ ChP 25℃~30 ℃ 40′～ 1h BP 30℃ 1h → v↑ → 甲臜分解↑ → %↓ ◆与硫酸的呈色反应 橙红 黄绿荧光 絮状↓玫瑰红 H2O 甾体激素母核能与H2SO4、H3PO4、HClO4、HCl等强酸呈色。 最常用的是H2SO4。 炔雌醇 IR 3300～3000cm-1 1900～1650cm-1 3750～3300cm-1 ν 衍生化反应 炔雌醇 m.p.201℃ 黄体酮 双肟m.p.238℃ 官能团呈色反应 (1). C17-?-醇酮基的呈色反应：具还原性、能与氧化剂碱性酒石酸铜试液、氨制硝酸银试液、碱性四氮唑试液反应而呈色。 (2). 酮基的呈色反应：C3-酮基和C20-酮基均能与异烟肼、2,4-二硝基苯 肼、硫酸苯肼等羰基试剂呈色。 (3). 甲酮基的反应：亚硝基铁氰化钠反应是黄体酮类专属鉴别方法， 在一定条件下，黄体酮显蓝紫色，其他常用甾体激素不显色或显淡橙色。 (6). 有机氟的呈色反应：含氟药物破坏后，与茜素氟蓝及硝酸亚铈起 呈色反应。 (4). 酚羟基的呈色反应：雌激素类C3位酚羟基与重氮苯磺酸反应生成红色偶氮染料 （5）炔基的沉淀反应 遇硝酸银试液生成白色炔银沉淀 (7). 酯的反应：甾体激素多以羧酸酯类用药 水解→ 游离羧酸 产生羧酸 特臭。醋酸可的松用EtOH制KOH及H2SO4使生成醋酸乙酯的香气鉴别 肾上腺皮质激素类药物特征反应。 ?-醇酮基有强还原性，与氧化剂作用，被氧化成水合醛。 C17 -α－醇酮基的还原性 TTC：氯化三苯四氮唑（又叫红四氮唑－RT） BT：蓝四氮唑 用于肾上腺皮质激素类药物鉴别和含量测定。 三苯甲瓒 氯化三苯四氮唑 （TTC） [H] ↓深红 2,3,5-Triphenyltatrazolium chloride Red tatrazoline RT (Formazan) ◆与碱性酒石酸铜的反应 Cu2O↓红 斐林试剂 ◆与异烟肼的反应 C3-酮基 C20-酮基 H+（缩合） 羟胺 、氨基脲、 异烟肼、硫酸