萃取溶剂对喜玛朗雅山杨梅多酚的提取与抗氧化活性的影响作用(修改).docx

·萃取溶剂对喜玛朗雅山杨梅多酚的提取与抗氧化活性的影响作用日土·塞尼，维纳·盖瑞，寇莎亚·丹哥摘要：喜玛朗雅山杨梅是印度喜玛朗雅山山区的一种水果，它的总多酚含量、抗氧化活性和抗癌活性含有四种不同的溶液体系，即：80%的甲醇、酸性甲醇、丙酮、酸性丙酮。试验表明，酸性丙酮提取物（MEAA）对喜马拉雅地区杨梅的酚类和黄酮类化合物回收率和氧自由基的清除率最高，而用丙酮（MEA），酸性甲醇（MEAM），和甲醇（MEM）提取物对三价铁还原活动影响较大。用丙酮（MEA）和酸性丙酮提取物（MEAA）可以增加有效的抗癌活动，导致C33A，SiHa和HeLa细胞的存活率减少70~92%，展现的细胞毒素水平接近正常转化细胞的水平。反向的高效液相色谱分析显示了丰富的没食子酸[793.74mg／100g的水果重量（FW）在MEA的]，杨梅素（345.6 mg／100 g FW在MEAA），咖啡酸(246.6 mg/100 gFW. 在 MeM),，儿茶素（190.181mg/ 100g FW在MEAA中)绿原酸（246.6 mg/100 gFW在MEAA中), 反式桂皮酸（5.91mg/ 100g f.w.在 MEA中),对香豆酸（5.84mg/ 100g在MEA水溶液中),和鞣花酸（2.21mg/ 100gFM在MEA水溶液中），证实了喜马拉雅地区的杨梅果实提取物高的抗氧化和抗肿瘤活性。关键词：喜玛朗雅山杨梅 抗氧化活性 抗癌活性 多酚引言：增加蔬菜和水果的消耗被认为是与许多慢性疾病的风险降低有着密切的关系，例如癌症、糖尿病、心血管疾病以及免疫功能紊乱等疾病，血管疾病，免疫功能紊乱等疾病。作为主要食物来源，蔬菜水果提供维持生命的营养素包括矿物质、维生素以及与多种植物化学物质的一起的酚类及黄酮类化合物。这些酚类及黄酮类化合物是已知的天然抗氧化剂，拥有许多健康促进作用，如抗炎，抗过敏，抗病毒，抗老化，抗致癌活性，这些主要归因于它们的抗氧化性质。水果的多酚已被证明具有强大的抗增殖特性，它能有效的抑制大范围的肿瘤细胞，包括结肠，前列腺癌和肝癌细胞。由于对癌症防护效果和超强的抗氧化性能，激起了全世界对于水果商业价值和野生类型的多酚含量和对于各种促进健康的性质的探索。喜玛朗雅山杨梅是一种分布在印度马来亚地区和印度喜玛朗雅山脉高处的亚热带森林中的一种带有医学性质的野生植物，因为它美味的果实和加工的副产物，它在当地居民中非常流行。与喜玛朗雅山杨梅果实流行相反的是，没有任何资料记载它的抗癌特性，同时对于它的多酚含量和抗氧化活性的研究也非常有限。因此，对于喜马拉雅杨梅水果酚和类黄酮含量治疗性的关注以及它们的各种生物活性的研究具有重要的意义。所以，目前的研究重点在于确定在不同的溶剂系统中喜马拉雅山杨梅果实中总酚和类黄酮含量，评估的各种的抗氧化剂和抗癌活性提取物和利用反向液相色谱分析酚类化合物。材料和方法：所有的试剂均为分析纯（纯度99％）。DPPH，NADH，苯基甲基硫酸盐（PMS），硝基蓝四唑鎓（NBT），β胡萝卜素，亚油酸，菲洛嗪，儿茶素，没食子酸，咖啡酸，绿原酸，鞣花酸，杨梅黄酮，对香豆酸，反式桂皮酸，和丹宁酸是从Sigma-Aldrich公司（斯德海姆采购，德国）。ABTS购自于Calbiochem，默克获得（达姆施塔特，德国）。其他化学品和试剂从HIMEDIA家具有限公司（印度孟买）购买。喜玛朗雅山杨梅果实的鉴定：在特里加瓦尔，北阿坎德邦，印度附近的丘陵地区，夏季四月至2010年5月时新鲜成熟喜马拉雅杨梅果实收获的时间。用自来水清洗水果，并保持在零下20℃以下，在印度北阿坎德邦德拉敦森林研究所系统植物学标本馆公司存放着带有树枝、树叶、花朵的喜马拉雅杨梅果实的样品，它已经被植物学鉴定和印证。提取物的制备和总酚类物质和黄酮类物质的评价：喜玛朗雅山杨梅果实的多酚提取是用80％的各抽取4种不同水溶剂。分别是甲醇（MEM）、pH为2.0的酸性甲醇（MEAM）、丙酮（MEA）、和pH为2.0的酸性丙酮（MEAA）。简单地说，在室温温度（RT）下，加入25克冷冻水果种子匀浆在混合机研磨机5分钟变成均匀的浆液。将五克的水果浆（匀浆）倒入100-mL锥形烧瓶中，并萃取三次用25ml溶剂30分钟振荡。将萃取液过滤，汇集，并离心（型号C24;雷米摩托车有限公司，新德里，印度），以获得清晰的提取物。萃取物储存在-20℃进一步使用。总酚含量根据标准确定使用福林-乔高特法，以没食子酸为标准来测量。总黄酮含量是根据确定Meda等使用儿茶素（Sigma-Aldrich公司），为标准。PPH自由基清除活性：DPPH自由基清除活性所引用的文献有轻微的修改。将提取物稀释（0.1ml）与DPPH溶液混合，（0.1ml在甲醇，5毫升），将混合物静置在黑暗环境中室温下20分钟吸光度测定是在517纳米