薄层色谱法注意事项.ppt

薄层色谱法检验注意事项 定义 薄层色谱法系指以适宜的固定相涂布于玻璃板、铝箔片或聚酯薄膜上使成一均匀的薄层，将供试品与相应的对照物点于薄层板的一端，以适宜的溶剂置展开容器内展开，使供试品所含的相应成分分离,采用适宜的显色剂或显色方法显色，将供试品色谱与对照物色谱相比较，或采用薄层扫描仪扫描，以进行鉴别、检查或含量测定的方法。 薄层板的制备 将1份固定相和3份水(或加有黏合剂如0.2～0.5%羧甲基纤维素钠水溶液)在研钵中向同一方向研磨混合,去除表面的气泡后,倒入准备好的玻璃板上,用洁净玻棒涂铺成一个均匀的薄层,再稍加振动,使整板薄层均匀。 0.2～0.5%羧甲基纤维素钠溶液:称取2—5g羧甲基纤维素钠,加1升水煮沸溶解,过滤, 静置，用时取上清液。 110℃活化30分钟，即置有干燥剂的干燥箱中备用。 点样 圆点点样直径为2～3mm，（高效薄层板一般不大于2mm），点间距离可视斑点扩散情况以不影响检出为宜，一般为1.0～2.0cm .点样基线距底边10 ～15mm. 点样 尽量用小的点样管。如果有足够的耐性，最好只用1微升的点样管。这样，点的斑点较小，展开的色谱图分离度好，颜色分明。样品溶液的含水量越小越好，样品溶液含水量大，点样斑点扩散大。样品溶液的溶剂一般是无水乙醇、甲醇、氯仿、乙酸乙酯。点好样的薄层板用电吹风的热风吹干或放入干燥器里晾干。 薄层色谱用于定量时，点样是最主要的误差来源。 供试液的溶剂均有不同程度的洗脱力，所以在点样的同时，样品在原点就可是成环形展开，原点直径的扩散促进了这种展开，Kaiser称之为“上样环形色谱效应”。如果样品在溶剂中的溶解度很大，原点将变成空心环。这种效应对随后的先行展开造成很不利的影响。 供试液的溶剂在原点的残留，也会改变展开的选择性，特别是供试液的溶剂与展开剂的极性相差较大时更明显。再者，亲水性溶剂残留在原点吸收大气中的水分（特别在高湿度环境）对色谱的影响也不可低估。因此点样时的同步干燥或继后干燥以除去原点残存的溶剂是需要的。但应尽可能避免高温加热，如用吹风筒加热，样品变为固态后，部分或全部强烈的吸附在吸附剂的颗粒上，而促进了硅胶的有催化作用的活性表面故态化学反应，导致样品的变性（尤其热不稳定物质），至少移动相在展开时对这部分样品的溶解速度比移动速度慢得多而形成拖尾（斑点拖尾的原因之一）。 展开 浸入展开剂的深度为距原点5mm(切勿将样点浸入展开剂中)，上行展距一般为8～15cm，高效板上行展距为5～8cm. 若展距过长，各个物质的分离更大，能够提高分离效果。但是斑点的扩散也更大，影响了斑点的集中。 展开剂的配置 选择合适的量器把各组成溶剂移入分液漏斗，强烈振摇使混合液充分混匀，放置，如果分层，取用体积大的一层作为展开剂。绝对不应该把各组成溶液倒入展开缸，振摇展开缸来配制展开剂。混合不均匀和没有分液的展开剂，会造成层析的完全失败。各组成溶剂的比例准确度对不同的分析任务有不同的要求， 展开系统的饱和 一般使用的是双槽的展开缸，一槽用来放展开剂，另一槽可加入氨水或硫酸。把待展开的板放入两槽间的平台，斜架着，盖上展开缸的盖子。让展开剂的蒸气充满展开缸，并使薄层板吸附蒸气达到饱和，防止边沿效应，饱和时间在半个小时左右。展开时难免要打开盖子把薄层板放入展开剂中，不过对薄层板与蒸气的吸附平衡影响不大，当然动作应该尽量轻、快。 温湿度的控制 温湿度的控制 温湿度对薄层影响都很大。不冻结的前提下，通常温度越低分离越好，较难的分离需在低温下分离，例如人参皂苷。湿度的影响，估计主要是影响薄层板的吸附能力，导致选择性（容量因子）的变化，湿度应根据实际情况确定。温度控制使用空调器或冰柜，湿度控制是通过在另一展开槽放置相应浓度的硫酸。 薄层扫描法——定义 系指用一定波长的光照射在薄层板上，对薄层色谱中可吸收紫外光或可见光的斑点，或经激发后能发射荧光的斑点进行扫描，将扫描得到的图谱及积分数据用于药品的鉴别、检查或含量测定的方法。 薄层扫描法——供试品制备和点样 供试品溶液至少制备2份，,供试品溶液和对照品溶液应交叉点于同一薄层色谱板上,供试品点样不得少于2个,对照品溶液每一浓度不得少于2个。 薄层扫描法——点样 根据实际情况，可调整供试品溶液与对照品溶液的点样量，以便测定。 待测成分斑点与相邻斑点的分离度至少在1.0以上，背景干扰尽量小。 以上介绍供参考！ 谢谢！ * *