2-2土壤中分解尿素的细菌的分离和计数.pptx

将接种的培养基和未接种的培养基都放在37度恒温箱，培养12h和24h,观察并记录结果。;四、课题延伸：菌种的保存;尿素分子的立体结构;课题2;1、常见的分解尿素的微生物;启示：寻找目的菌种时要根据它对生存环境的要求，到相应的环境中去寻找。;1、实验室微生物的筛选原理（P21）;2、选择培养基; 1.在培养基的配方中，为微生物的生长提供碳源和氮源的分别是是什么物质？;（二）统计菌落数目;1、显微镜直接计数法;每一个大方格边长为 1mm ，则每一大方格的面积为1mm2，盖上盖玻片后，载玻片与盖玻片之间的高度为0.1mm，所以计数室的容积为0.1mm3。　　;2、统计菌落数目——稀释涂布平板法;平板菌落数统计注意事项;【例1】某同学在稀释倍数为106的培养基上测得平板上的菌落数的平均值为234，那么每毫升样品中菌落数是（涂布平板时所用稀释液的体积为0.1 mL） A.2.34×108　　　　　　B.2.34×109 C.234　　　　　　　　　D.23.4;【解析】选B。稀释倍数为106，0.1 mL稀释液的菌落数的平均值为234，则每毫升样品中菌落数就为234/0.1×106=2.34×109。;思考2：为什么测平板上的菌落数可以推测样品中的活菌的数目？;思考3：统计的菌落数往往比活菌的实际数目高还是低，为什么？; 第一位同学只涂布了一个平板，没有设置重复组，因 此结果不具有说服力。 第二位同学考虑到设置重复组的问题，涂布了3个平板，但是，其中1个平板的计数结果与另2个相差太远，说明在 操作过程中可能出现了错误，因此，不能简单地将3个平 板的计数值用来求平均值。;启 示;实例分析2;实例分析2;实例分析; 实验结果要有说服力，对照的设置是必不可少的！;;土壤中分解尿素的细菌的分离与计数; 制备5个牛肉膏蛋白胨培养基和15个选择培养基，准备好无菌试管和移液管。　; 制备5个牛肉膏蛋白胨培养基和15个选择培养基，准备好无菌试管和移液管。 注：每个稀释度下需要3个选择培养基（平行重复原则），1个牛肉膏蛋白胨培养基。选用稀释倍数为103~107的稀释液。　　;;　　 因为土壤中各类微生物的数量(单位：株/kg)是不同的，例如在干旱土壤中的上层样本中：好氧及兼性厌氧细菌数约为2 185万，放线菌数约为477万，霉菌数约为23.1万。因此，为获得不同类型的微生物，就需要按不同的稀释度进行分离，同时还应当有针对性地提供选择培养的条件。;　　测定土壤中细菌的数量，一般选用104、105和106倍的稀释液进行平板培养；测定放线菌的数量，一般选用103、104和105倍稀释液；测定真菌的数量，一般选用102、103和104倍稀释液。; 将10g土样加入盛有90mL无菌生理盐水的锥形瓶中,充分摇匀，吸取上清液1mL，转移至盛有9mL水的无菌试管中，依次等比稀释至107稀释度，并按照由107至103稀释度的顺序分别吸取0.1mL进行平板涂布操作。按照浓度从低到高的顺序涂布平板，不必更换移液管。　;　　将涂布好的培养皿放在30℃下培养。比较牛肉膏培养基和选择培养基中菌落的数量、形态等，并做好记录。 　　;　　不同种类的微生物，往往需要不同的培养温度和培养时间。细菌一般在30~37℃的温度下培养1~2d；放线菌一般在25~28℃的温度下培养5~7d；而霉菌一般在25~28℃的温度下培养3~4d。;　　一般来说，在一定的培养条件下(相同的培养基、温度及培养时间)，同种微生物表现出稳定的菌落特征。菌落形状、大小、隆起程度和颜色; 当菌落数目稳定时，选取菌落数在30~300的平板进行计数。在同一稀释度???，至少对3个平板进行重复计数，然后求出平均值，并根据平板所对应的稀释度计算出样品中细菌的数目。　;操作提示;课题延伸; 1、结合对照，分析培养物中是否有杂菌污染以及选择培养基是否筛选出一些菌落。 2、是否获得了某一稀释度下，菌落数目在30——300的平板。在这稀释度下，是否至少有两个平板的菌落数相近？ 3、你统计的每克土壤中含有能分解尿素的细菌的菌落数是多少？与其他同学的结果接近吗？如果差异很大，可能是什么原因引起的？;——滤膜法;作业： 1.阅读课本p21-p26 2.完成本节创新设计大书