核酸提取原理及常见问题.pptx

核酸提取原理及常见问题;第一部分：DNA提取方法简介;　基因组DNA的提取;　CTAB法原理;　CTAB提取缓冲液的经典配方;细胞裂解后释放的植物次生代谢产物和多酚类化合物易于氧化 ,氧化的多酚结合到DNA 分子上而致 D N A 降解； 多糖的性质与核酸类似，会与核酸一同沉淀下来，影响植物核酸纯度。;　CTAB提取缓冲液的改进配方;改良方法 2;　CTAB法流程图; SDS法原理;SDS 法操作简单 , 温和 , 也可提取到较高分子量 DNA ,但所得产物含糖类杂质较多 CTAB法的最大优点是能较好地去除糖类杂质; SDS法流程图;酚氯仿裂解法;用乙醇沉淀DNA时，通常要在溶液中加入单价的阳离子，如NaCl?或?NaAc，Na+中和DNA分子上的负电荷，减少DNA分子之间的同性电荷相斥力，而易于聚集沉淀。;DNA提取常见问题; ; ;　RNA的提取;　异硫氰酸胍/苯酚法;Trizol法适用于普通的植物组织、动物组织以及真菌和细菌等。;酚??化合物被氧化后会与RNA不可逆地结合，导致RNA活性丧失及在用苯酚、氯仿抽提时RNA的丢失，或形成不溶性复合物； 而多糖会形成难溶的胶状物，与RNA共沉淀下来；萜类化合物和RNase会分别造成RNA的化学降解和酶解。;针对多糖多酚植物，可以采用CTAB法和Trizol法结合的方法，针对性的去除多糖多酚。 对于富含色素、蛋白和多糖的藻类，可采取试剂盒方法。 组织量较少的样品，在沉淀时刻加入糖原，增加终浓度等。;影响RNA提取的因素; 样品破碎及裂解： 根据不同材料选择不同的处理方法： 培养细胞：通常可直接加裂解液裂解 酵母和细菌：直接液氮研磨，之后用Trizol裂解 动植物组织：先液氮研磨和匀浆，后加裂解液裂解。有些样品如肌肉或者动物脏器需要加入裂解液后进行湿磨，以充分研磨。 为减少DNA污染，可适当加大裂解液的用量;; RNA提取常见问题;RNA降解; OD260 /OD280 比值偏低; ; 总量偏低;正常条带;;;真菌和细菌等;动物组织;谢谢