细胞内p53蛋白LC_MS_MS定量方法及其应用_李盈淳.pdf

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2017-05-29 发布于河南
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细胞内p53蛋白LC_MS_MS定量方法及其应用_李盈淳

学报 Journal of China Pharmaceutical University : 2012 ，43 (6)519 － 525 519 细胞内p53 蛋白LC-MS /MS 定量方法及其应用 * ＊＊，，，，李盈淳汤志远吴梦秋王广基郝海平 ( ，京210009) 中国药科大学药物代谢动力学重点实验室南 p53 LC-MS /MS ， D p53 摘要建立细胞样品中蛋白的定量方法应用该定量方法测定放线菌素作用下细胞中表达。 p53 ，， VEY- 量的变化采用免疫沉淀法提取细胞样品中的蛋白对提取后的样品进行酶解基于肽图分析选择特异性肽段 LDDR (m /z 455. 22 + -681. 21 + )作， VEYIEDR (m /z 462. 12 + -695. 21 + )作，为定量肽段设计合成肽段为内标肽段建立该肽段的 LC-MS /MS ， p53 ; D HCT116 p53 定量方法通过该肽段表征蛋白的量应用该质谱定量方法对放线菌素给药后的细胞中的。p53 ， (R2 = 0. 999 3)， 2. 2 ～ 112. 3 pmol /mL ; 蛋白的表达量进行测定蛋白质谱定量方法学考证表明方法的线性良好范围，， ; D p53 专属性好基质中无干扰成分批内批间精密度及稳定性均符合生物样品的测定要求放线菌素给药后细胞中蛋白。 p53 LC-MS /MS 的表达量呈给药浓度与给药时间依赖性增加建立的细胞样品中蛋白的定量方法可以准确的测定细胞内 p53 。的蛋白表达量 p53 ;LC-MS /MS ; D ; 关键词