耐碱性木聚糖酶基因在短小芽孢杆菌中高效分泌表达的研究.pdf

卷 期 !! ! 微 生 物 学 报 %’ (!! . (! 年 月 ##! $ !#$ %’()(*(+$ ,-$ )*+*,- ##! !!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!! 耐碱性木聚糖酶基因在短小芽孢杆菌中高效分泌表达的研究 刘伟丰 毛爱军 祝令香 赵 云 董志扬 （中国科学院微生物研究所 北京 1###$# ） 摘 要：从木聚糖酶高产短小芽孢杆菌（ ） 中克隆得到木聚糖酶基因 ，将其构建在芽孢杆菌 !#$%%’ ( )$%’ NO?1 *+,- 表达载体P8Q1?# 中得到重组质粒P87511。*+,- 由木糖诱导*+%- 启动子调控*+,- 表达。采用同源高效表达策 略，以原生质体转化方法将P87511 转回原始菌株NO?1 中，获得重组菌株NO511。通过木糖诱导重组菌株中的*+. ,- 基因高效分泌表达，使木聚糖酶产酶活力比原菌株NO?1 提高了$J R ，同时对重组表达的木聚糖酶的酶学性质进 行了初步研究。 关键词：木聚糖酶，短小芽孢杆菌，芽孢杆菌表达系统 中图分类号： 文献标识码： 文章编号： （ ） SJ$/ ) ###16/#I ##! #!6#!$J6#! 内切 ，木聚糖酶［ ］是木聚糖酶 61 !6 @40 T T 1T $ ! ! 材料和方法 系中最主要的酶，它通过催化水解木聚糖主链内部 的 ，木糖苷键来降解木聚糖，其产物以寡聚木 材料 61 !6 ! ! ! 糖、木二糖为主伴有少量的木糖。随着木聚糖酶在 !# !# ! 菌株和质粒：大肠杆菌/’#012$#0$ #3%$ UQ? 、 造纸、饲料及食品发酵工业中的广泛应用，木聚糖酶 短小芽孢杆菌 !#$%%’ ( )$%’ NO?1 为本实验室保 已成为酶学研究领域的一个重要对象。通过现代分 存；质粒PV@W69 @=,F 购于OXA:+= 公司，芽孢杆菌 子生物技术构建木聚糖酶高产工程菌以及改良木聚 分泌表达载体P8Q1?# 购于WNB9:H 公司。 ［，］ 糖酶性质已是目前研究方向之一1 。 培养基： 培养基见文献［］； 培养基 ! !#$ YN J )N0 木聚糖酶广泛存在于细菌、真菌、藻类等微生物 配成1TJ? R ，购自UBLH 公司；芽孢杆菌转化培养基、 中，不同来源的木聚糖酶性质也各不相同。短小芽 液、 液和 培养基见 公司操 7WW 7WWO 4Z? WNB9:H 孢杆