基因工程(跨课程)综合性实验论文.doc

基因工程（跨课程）综合性实验论文 姓 名 班 级 生物技术 学 号 指导教师 目 录 摘要 2 前言 2 1 材料与方法 4 1.1 材料 4 1.1.1 重组蛋白质药物单元的实验材料 4 1.1.2 重组DNA药物单元的实验材料 4 1.2 方法 5 1.2.1 重组蛋白质药物单元 5 1.2.1.1 工程菌构建（已由老师完成） 5 1.2.1.2 工程菌表达筛选 6 1.2.1.3 制备IL-18工程菌甘油种 8 1.2.1.4 GST工程菌生长曲线分析 8 1.2.1.5 GST工程菌表达影响因素试验（诱导时机的影响） 8 1.2.1.6 表达进程分析 9 1.2.1.7 凝胶扫描分析 9 1.2.1.8 发酵工艺（观摩） 9 1.2.1.9 表达产物分离纯化（由老师示教） 9 1.2.2 重组DNA药物单元 9 1.2.2.1 TCR工程菌构建（示教） 10 1.2.2.2 质粒TCRVα12.2-Vβ7.1-EYFP的大规模制备 10 1.2.2.2 TCR质粒-脂质体复合物制备与分析 11 1.2.2.4 TCR体外转染活性检测 11 1.2.2.5 TCR转染体内试验 12 2 结果与讨论 12 2.1 重组蛋白质单元结果与讨论 12 2.1.1 IL-18工程菌表达筛选SDS 12 2.1.2 GST工程菌生长曲线分析 14 2.1.3 表达影响因素试验 14 2.1.4 表达进程试验 16 2.2 重组DNA药物单元结果与讨论 19 2.2.1质粒阴离子交换层析纯化 19 2.2.2 质粒柱层析样品琼脂糖电泳分析 19 2.2.3 质粒-脂质体复合物制备 21 2.2.4 TCR转染基因表达荧光检测 21 2.2.5 TCR体外转染活性检测 21 2.2.6 TCR转染体内试验 23 3 小结 24 致谢 25 摘要 本综合性实验分为“重组蛋白质类药物”和“重组DNA类药物”二个单元。重组蛋白质药物以hIL-18的大肠杆菌表达系统为例，全面介绍工程菌构建、表达筛选、甘油种制备、生长与表达分析、发酵工艺单元操作和表达产物分离纯化等基因工程药物研发与生产实践中最常用的技术与工艺过程。“重组DNA药物”单元以质粒TCRVα12.2-Vβ7.1-EYFP为例，介绍质粒DNA大规模制备、阳离子脂质体与质粒DNA复合物制备、T细胞体外转染、转染T细胞目的基因表达和体外活性检测、体内给药试验等。 关键词 重组蛋白药物; hIL-18 ; 重组DNA药物 ; 阳离子脂质体与质粒DNA复合物 Abtract The comprehensive experiments are divided into two units ,which is Recombinant Protein Drugs and Recombinant DNA Drugs. The unit ,Recombinant protein drugs ,takes example for hIL-18 in E. coli expression system.It comprehensively introducted ?the most usual technology and process of R D and ?production practice of the genetic engineering drugs , such as the construction of engineering bacteria, expression screening, glycerol kind of preparation, growth and Expression Analysis, fermentation process unit operation and the purification of expression product.The unit of Recombinant DNA drug taked plasmid TCRVα12.2-Vβ7.1-EYFP as example.It introducted the large-scale preparation of plasmid DNA, Preparation of cationic liposomes- plasmid DNA complex, in vitro Transfection of T cells, expression and in vitro activity assaying of the target gene of transfected T cell