2015版中国药典微生物限度.ppt

微生物限度检查法 《中国药典》2015年版修订后将分为三个附录： 1、非无菌产品微生物限度检查：微生物计数法 2、非无菌产品微生物限度检查：控制菌检查法 3、非无菌药品微生物限度标准 1.1 总则：环境、要求 1.2 计数方法：平皿法、薄膜过滤法、最可能数法（MPN法） 1.3 计数培养基适用性检查和供试品计数方法适用性试验：菌种及菌液制备、培养基适用性检查、计数方法适用性试验。 1.4 供试品检查：检验量、供试品检查 1.5 结果判断 1.6 稀释液、冲洗液及培养基 1.非无菌产品微生物限度检查：----微生物计数法 微生物计数法系用于能在有氧条件下生长的嗜温细菌和真菌的计数。 当本法用于检查非无菌制剂及其原、辅料等是否符合规定的微生物限度标准时，应按规定进行检验，包括样品的取样量和结果的判断等。除另有规定外，本法不适用于活菌制剂的检查。 本检查法可采用替代的微生物检查法，包括自动检测方法，但必须证明替代方法等效于药典规定的检查方法。 1.1 总则： 1.1 总则： 环境： 微生物计数试验环境应符合微生物限度检查的要求。(在不低于GMP 现行版要求的D 级洁净环境、局部洁净度不低于B 级的单向流空气区域内进行)【10版：在环境洁净度10000级下的局部洁净度100级的单向流空气区域内】。 检验全过程必须严格遵守无菌操作，防止再污染，防止污染的措施不得影响供试品中微生物的检出。 单向流空气区域、工作台面及环境应定期进行监测。 1.1 总则： 如供试品有抗菌活性，应尽可能去除或中和。供试品检查时, 若使用了中和剂或灭活剂，应确认其有效性及对微生物无毒性。 供试液制备时如果使用了表面活性剂，应确认其对微生物无毒性以及与所使用中和剂或灭活剂的相容性。 平皿法 薄膜过滤法 最可能数法（Most-Probable-Number Method，简称MPN 法）。 MPN 法用于微生物计数时精确度较差，但对于某些微生物污染量很小的供试品，MPN 法可能是更适合的方法。 供试品检查时, 应根据供试品理化特性和微生物限度标准等因素选择计数方法，所选的方法必须具备检测充足样品量的能力，以保证所获得的试验结果能够判断供试品是否符合规定。所选方法的适用性须经确认。 1.2计数方法： 供试品微生物计数中所使用的培养基应进行适用性检查。 供试品的微生物计数方法应进行方法适用性试验【10版：方法验证】， 以确认所采用的方法适合于该产品的微生物计数。 若检验程序或产品发生变化可能影响检验结果时， 计数方法应重新进行适用性试验。 1.3 计数培养基适用性检查和供试品计 数方法适用性试验 1.3.1菌液制备及使用 1.3.2计数培养基适用性检查 1.3.3计数方法适用性试验 1.3 计数培养基适用性检查和供试品计 数方法适用性试验 1.3.1菌液制备及使用 菌种  试验用菌株的传代次数不得超过5 代（从菌种保藏中心获得的干燥菌种为第0 代），并采用适宜的菌种保藏技术进行保存，以保证试验菌株的生物学特性。 1.3 计数培养基适用性检查和供试品计 数方法适用性试验 菌液制备后若在室温下放置，应在2 小时内使用；若保存在2～8℃，可在24小时内使用。稳定的黑曲霉孢子悬液可保存在2～8℃，在验证过的贮存期内使用。 1.3.1菌液制备及使用 试验菌株 试验菌液的制备 金黄色葡萄球菌 〔CMCC(B) 26 003)〕 胰酪大豆胨琼脂培养基或胰酪大豆胨液体培养基 【10版：营养肉汤或营养琼脂培养基】 30～35℃，18～24小时 铜绿假单胞菌 〔CMCC（B)10 104〕 枯草芽孢杆菌 〔CMCC(B) 63 501〕 白色念珠菌 〔CMCC(F) 98 001〕 沙氏葡萄糖琼脂培养基或沙氏葡萄糖液体培养基，20～25℃，2～3 天 【10版：改良马丁（琼脂）培养基，23~28 ℃ ，24~48h】 黑曲霉 〔CMCC(F) 98 003〕 沙氏葡萄糖琼脂培养基或马铃薯葡萄糖琼脂培养基 ，20～25℃，5～7天 ，或直接获得丰富孢子 【10版：改良马丁琼脂斜面培养基，23~28 ℃ ，5~7天】  1.3.2计数培养基适用性检查【10版】 细菌计数 金黄色葡萄球菌 营养琼脂培养基 30～35 ℃ 不超过3天 铜绿假单胞菌 枯草芽孢杆菌 霉菌及酵母菌计数 白色念珠菌 玫瑰红钠琼脂培养基 20～25 ℃ 不超过5天 黑曲霉 每一试验菌株平行制备2 管或2 个平皿；接种量50~100cfu ； 同时，用相应的对照培养基替代被检培养基进行上述试验。 结果判定： 若被检培养基上的菌落平均数不小于对照培养基上的菌落平均数的70 %，且菌落形态大小与对照培养基上的菌落一致，判该培养基的适用性检查符合规定。 1.3.2计数培养基适用性检查【15版】 需氧菌总