内酯样品分析.docx

银杏内酯的检测分析1概述1.1基本原理待检测分析的目标物在经过超高效液相色谱分离后进入ESI电离源，经电离后进入Q1，在Q1中筛选出目标离子，目标离子在Q2中经碰撞破裂，碎片粒子进入Q3，Q3分析记录碎片粒子信息。从而同时得到目标物的保留时间，分子量，碎片信息等。超高效液相色谱串联二级质谱可以快速高效的同时分离检测多个目标物，同时样品不需要经过复杂的前处理，被广泛应用于生物，制药等领域。1.2 基础结构图1.液质联用仪工作原理图（1）超过液相色谱：分离目标物，运输目标物进入ESI。配有2个超高压泵系统，自动进样器，柱温箱（2）氮气发生器：产生氮气，并输送至ESI电离源（3）ESI电离源：雾化样品溶液，并电离样品（4）三重四极杆：碎裂目标物，检测目标物碎片。1.3 仪器操作规程1.开机（1）依次打开自动进样器，柱温箱，泵，氮气发生器以及CBM和电脑电源。等待仪器连接。（2）打开LabSolutions主窗口，双击lcms8030，进入实时分析窗口，点击自动排气。等待排气完成。2. 测样Q3扫描模式：点击文件，新建方法，创建Q3全扫描（即创建+/-两种扫描模式），设置扫描范围与扫描速度以及扫描时间（1min），设置Lc时间为1min，设置流动相比例和柱温箱温度。保存方法，下载方法。点击单次分析，设置进样瓶号，样品架号，进样量为0.2ul。点击确定，进行分析。MRM优化：新建方法，选择MRM模式，根据Q3扫描结果，确定母离子，执行MRM优化。得到优化结果，保存方法。检测：安装色谱柱，调用保存的优化的MRM方法，设置色谱条件，保存方法，下载方法，点击批处理，建立批处理方法，保存批处理，点击开始批处理。数据分析：在LabSolutions主窗口点击Postrun，双击Browser，对数据进行处理。3. 关机点击实时分析窗口中的lc，ms开关，关闭泵，柱温箱和质谱仪。等待加热模块温度降到50摄氏度左右，退出软件。关闭泵、柱温箱、自动进样器和CBM以及氮气发生器的电源。实验部分实验目的（1）熟悉岛津lcms8030液质联用仪的结构、分离检测原理和操作程序。（2）掌握氨基酸标样的分析方法。实验原理四种银杏内酯在经过超高效液相色谱分离后进入ESI电离源，经电离后进入Q1，在Q1中筛选出目标离子，目标离子在Q2中经碰撞破裂，碎片粒子进入Q3，Q3分析记录碎片粒子信息。从而同时得到目标物的保留时间，分子量，碎片信息等。仪器和试剂1.仪器：岛津lcms8030液质联用仪（配氮气发生仪）1.材料：银杏内酯标准品3.试剂：乙腈（色谱纯）甲醇（色谱纯）水（哇哈哈纯净水）实验步骤1.标准品溶液的配制与流动相处理：（1）精确称量适量白果内酯、银杏内酯A、B、C，用甲醇溶解定量于容量瓶中，配制成四种内酯浓度约为1mg/ml的混合标准溶液。（2）将乙腈和水分别经过0.45um微滤膜过滤，并超声脱气处理20min。2.质谱条件优化母离子的选择采用Q3全扫描模式，检测母离子。根目标物的分子量以及母离子的丰度确定母离子和ESI电离模式子离子和碰撞电压的优化根据所选择的母离子和电离模式，执行MRM自动优化程序，得到优化结果，保存方法均采不接柱，进样量0.2ul3.色谱条件的设置色谱柱：Waters ACQUITY UPLC C18?（50*2.1mm,1.7um）流动相：A-水；B-乙腈流量：0.5ml/min柱温：38℃流动相洗脱程序时间（min）流动相A 流动相B 0 90% 10% 5 70% 30% 5.10 90% 10% 8 90% 10% 4.数据采集打开实时分析软件，采集数据标准曲线的制作：将配制好的标准品溶液稀释成0,5,10,15,20五个浓度梯度，调用保存的方法，进样分析，进样量为3ul。得到数据。样品检测：用同样的方法对样品溶液进行分析，得到数据结果处理：在Browser窗口中对标准品的物质峰进行积分，并以浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，生产标准曲线。添加未知样品，查看样品结果。注意事项1、流动相必须用HPLC级的试剂，使用前过滤除去其中的颗粒性杂质和其他物质(使用0.45um或更细的膜过滤)。2、流动相过滤后要用超声波脱气，脱气后应该恢复到室温后使用。 3、不能用纯乙腈作为流动相，这样会使单向阀粘住而导致泵不进液。4、每次做完样品后应该用溶解样品的溶剂清洗进样器。5、气泡会致使压力不稳，重现性差，所以在使用过程中要尽量避免产生气泡。思考题1、试述MRM模式下各四极杆室的运行情况。2、如果知道一种物质的碎片大小，想知道这种物质的分子量，该选用何种扫描模式？