一种水稻总RNA提取的简易方法.pdf

第31卷第4期 曲阜师范大学 V01．31No．4 of 2005年10月 JoumalQl血 No彻a1 Oct．2005 一种水稻总RNA提取的简易方法8 高志勇 (渭南师范学院化学化工系，714000，陕西省渭南市) 摘要：应用高效惭zol试剂，对水稻根、叶、花材料进行了总RNA的提取．采用摸索后的优化程序，可在 不用液氮的室温下，1h完成总RNA的提取．电泳结果可见清晰的条带，表明RNA的完整性较好；紫外测定结 果表明了RNA的纯度较高，所得检测结果说明所得总RNA产品可作进一步的实验之用． 关键词：水稻；总RNA；提取 文献标识码：A 文章编号：100l一5337(2005)呻009r7—02 中图分类号：Q522；Q943．2 近年来，随着生物技术的进步和发展，基因的克 存，备用． 隆和表达研究，需要从植物材料中提取高纯度的 1．2 总RNA的提取 础妊¨j．尽管RNA的提取已经成为很成熟的技术， (1)取O．1_g材料放人研钵中，加1mI腼zol，少 但在实际研究中经常很难做到顺利获得质量好的 许石英砂，研磨成浆；(2)转入1．5rnL离心管中，加 RNA．这归咎于很多因素(如材料的保存不合理、器O．2mL三氯甲烷，剧烈振荡混匀15s；(3)12000rpm 具不洁净、操作不严等)造成RNA的降解．而且提取离心10 不同植物材料中RNA的最适宜条件及其相应方法 丙醇，静止10min；(5)12000 也不尽相同幢J． 清，沉淀用75％乙醇洗涤2次，每次0．7mL，12000 水稻(0嗍剃溉L．)是我国栽培历史最悠久的rpm离心2min；(7)弃上清，自然或其它方式风干沉 作物之一，现全世界广为栽培，以我国栽培面积最 J． 备用． 广，产量占世界第一位，为最有价值的粮食作物b 在我国三大主要粮食品种水稻、小麦、玉米中，水稻 1．3总RNA纯度鉴定 的总产量位居第一f4』，是我国粮食安全保障的核心， (1)保存的总RNA 因而对水稻的生长发育及其经济性状的研究是长 期、重大的科学问题．本研究所用的水稻材料“滇粳 o￡‰比值在1．8～2．0之间，表明删A纯度符合实验 优5号”，是云南省农科院粳稻育种中心2001年育 成的落粒型细长优质粳稻香米新品种，组合为滇粳 40 x稀释倍数／1000，求出RNA浓度． 优2号／滇粳优1号[5j，对其进行分子生物学的研究1．4甲醛变性琼脂糖电泳鉴定RNA的完整性 具有现实的意义． (1)将甲醛贮存液、琼脂糖水溶液(1％)、5x甲 醛凝胶电泳缓冲液按1：3．5：1．1比例混合，制备凝 1材料和方法 胶；(2)甲醛一甲酰胺凝胶变性电泳样品的制备：总 RNA溶液2止；5x甲醛凝胶电泳缓冲液2皿；甲醛 1．1材料的采集与处理 在滇粳优5号水稻孕穗期时，到大田中采集整 1 rnin．(3)上样，50V预电泳5IIlin，80V电泳1h，在 株材料，拿回实验室后立即冲洗干净，分别将叶、花、 根部分剪碎，立即用液氮将其速冻，放人冰箱中保 *收稿日期：2005一04一05 基金项目：?胃南师范学院科研计划项目(04YKs021) 作者简介：高志勇，男，1966一，硕士；主要研究方向：植物分子