NaOH皂化反相高效液相色谱法测定雨生红球藻中虾青素.pdf

维普资讯 第2l卷第 6期 分 析 科 学 学 报 2005年 l2月 Vo1．2l No．6 J()URNALOFANALYF1CAL SCIENCE Dec． 2005 文章编号 ：1006—6144(2005)06—0619—04 NaOH皂化反相高效液相色谱法测定 雨生红球藻中虾青素 齐安翔 ，蔡明刚 1,2，张 英 ，金贵娥 (1．厦门大学海洋系 ；2．厦门大学亚热带海洋研究所 ，福建厦门 361005) 摘 要：建立了一种雨生红球藻中虾青素酯皂化的反相高效液相色谱方法。采用二极 管阵列检测器(DAD)在 476nm处进行检测，虾青素在 15min内得到了较好的分离。 虾青素 的含量在 1～15mg／L范 围内与峰 面积具有 良好 的线性关系，相关系数为 0．9993；方法的检 出限为 0．049mg／L，RSD为 3．27 ，及 回收率为 100．7 。应用本 法测定出雨生红球藻中虾青素的总含量为9．79～24．70mg／L。 关键词：虾青素；雨生红球藻；虾青素酯；皂化；高效液相色谱法 中图分类号：O657．72；Q949．29 文献标识码 ：A 虾青素(Astaxanthin)具有清除氧 自由基的强大能力，其抗氧化性是类胡萝 卜素的 1O倍、维生素E的 550倍[1]，在国外已被应用于食品、医药等行业及水产养殖业中[2]。雨生红球藻(HaematococcusPhuvia— lis)在特定条件下可积累占干重 196／以上的虾青素，被看作是天然虾青素的 “浓缩品”[3]和最佳的生物来 源，并 已成为近年来 国际上虾青素研究的热点[3“]。 雨生红球藻中虾青素的定量分析是评价其质量的基本保障。雨生红球藻中虾青素主要以虾青素酯的 形式存在嘲，后者组成复杂，且无标准物质 。目前高效液相色谱法(HPLC)法无法有效分离雨生红球藻中 的色素组分，存在分离时间过长，无法确定虾青素酯的具体组分等缺点[6]。本研究建立了一套基于皂化反 应的雨生红球藻中虾青素的HPLC分析方法。皂化反应可以使虾青素酯水解为游离的虾青素，减少色谱 分析峰的数量，增加虾青素的峰面积，及降低分析样 品用量，缩短分析时间。应用本法测定出雨生红球藻 中虾青素的总含量为 9．79~24．70mg／L。 1 实验部分 1．1 主要仪器和试剂 HP1100型高效液相色谱仪系统，附HPChemStation色谱工作站，HPG1315A型单泵；TCL一16G高 速冷冻离心机；CQ50超声波清洗器 ；721型分光光度计 。 虾青素标准溶液：准确称取 10mg虾青素标准品(购 自Sigma公司)，用少量二氯 甲烷使之溶解 ，用 乙 腈一甲醇(75：25，v／v)定容，配成 100mg／L的标准溶液，于棕色瓶 中一20~C下保存。甲醇和乙腈为色谱纯 试剂；二氯 甲烷和丙酮为分析纯试剂；水为超纯水。 1．2 色素提取及虾青素酯皂化 1．2．1 色素提取 移取5mL胁迫后的雨生红球藻藻液，3000r／min离心 5min，弃去上清液，加入5mL 超纯水清洗，重复两次。加入2mL丙酮，用玛瑙研钵研磨 1min，10000r／min低温离心 15min，保留上 清液 ，重复 以上操作 3～5次，直至藻团呈白色。将提取液以 10000r／min离心 15min，上清液在一20~C 下密封保存，或用氮气挥干 ，再用乙腈一甲醇(75：25，V／)溶液溶解 ，然后在一20~C下密封保存 。 收稿 日期 ：2005—08—09 通讯联系人 ：蔡明刚 基金项 目：福建省科技项 目(No．2002Y052)；厦门市科技项 目(No．3052；厦门大学 “挑战杯”科研计划 619 维普资讯 第6期 齐安翔等 ：Na()H皂化反相高效液相色谱法测定雨生红球藻中虾青素