液相色谱分析概论.ppt

液相色谱分析 主讲: 文娜 新疆分析测试中心 0991-3835921讲 课 提 纲 一、色谱法基础 二、液相色谱仪组成及工作原理 三、液相色谱固定相和流动相 四、液相色谱仪定性、定量方法 五、液相色谱操作条件的选择 第一章 色谱基础 本章内容： 液相色谱发展史 液相色谱的基本概念 影响峰形扩展的因素 固定相——CaCO3颗粒 流动相——石油醚 第一节 色谱的发展史 一、起源 二、色谱的发展： 30～40年代发展了柱分配色谱、纸色谱 50年代发展了气相色谱、薄层色谱 60年代发展了高效液相色谱法 按分离机制分： 按分离过程物理化学原理分类的各种液相色谱法的比较 液相色谱与气相色谱的比较 液相色谱所用基本概念：保留值、塔板数、塔板高度、分离度、选择性等与气相色谱一致。液相色谱所用基本理论：塔板理论与速率方程也与气相色谱基本一致。但由于在液相色谱中以液体代替气相色谱中的气体作为流动相，而液体和气体的性质不相同；此外，液相色谱所用的仪器设备和操作条件也与气相色谱不同，所以，液相色谱与气相色谱有一定差别，主要有以下几方面： 四、高效液相色谱法的特点 分离效能高 柱效可达2×103～5×104块/m理论塔板数，远远高于气相色谱填充柱103块/m理论塔板数的柱效 选择性高 可分析不同类型的有机化合物及其同分异构体，还可分析在性质上极为相识的旋光异构体 检测灵明度高 紫外检测器最小检出量可达10-9g;荧光检测器最小检出量可达10-12g。 分析速度快 相对经典液相色谱，分析时间大大缩短。 第二节 色谱基本理论 定性参数 定量参数 柱效参数 分离参数 续前 （一）色谱流出曲线和色谱峰 1．色谱流出曲线　是由检测器输出的电信号强度对时间作图所绘制的曲线，又称为色谱图。 2．基线　是在操作条件下，没有组分流出时的流出曲线。 二、定性参数 （一）保留值 1．保留时间 (retention time；tR) 是从进样到某组分在柱后出现浓度极大时的时间间隔，即从进样开始到某个组分的色谱峰顶点的时间间隔。 2．死时间 (dead time；t0) 是分配系数为零的组分，即不被固定相吸附或溶解的组分的保留时间。 3．调整保留时间 (adjusted retention time； ) 2．半峰宽 (peak width at half height；W1/2) 是峰高一半处的峰宽。 W1/2=2.355σ 3．峰宽 (peak width；W) 是通过色谱峰两侧拐点作切线在基线上所截得的距离。 W=4σ 或 W=1.699W1/2 四、分离参数 若R=1， 两峰基本分开。 若R=1.5，两峰完全分开(基线分离)。 2.基本分离方程式 （1）柱色谱 a项取决于柱效，n↑，a项↑ b、c项相关 在GC中： b项主要受色谱柱性质影响 c项主要受柱温影响 在HPLC中： b项主要取决于流动相的种类 c项主要取决于流动相的配比 3．容量因子(capacity factor；k) 组分在固定相和流动相中的量(m)之比。 （一）影响板高因素的讨论 1．涡流扩散(eddy diffusion)　也称为多径扩散。 A=2?dp ?-----填充不规则因子 dp----填料 (固定相) 颗粒的平均直径 二、液相色谱法速率理论 （一）Giddings液相色谱速率方程式 Giddings与Snyder等人提出的液相色谱速率方程式： H = He+ Hd+Hm+Hsm+Hs 或： H=A+B/u+Cmu+Csmu+Csu 讨论： 1. 流动相流速与板高的关系 H =A + Cu u∝H 2. 涡流扩散项 A=2λdp 采用小粒度、球形固定相。常用3～10μm的填料。匀浆法装柱。 3.传质阻抗系数 在液相中，采用化学键合相，“固定液”只是在载体表面的一层单分子层，因此，在液相中的传质阻抗可以忽略。则： H = A + Cmu + Csmu 4.传质阻抗对板高的影响 ①Cm及Csm都与固定相的粒径平方dp2成正比，与扩散系数Dm成方比。因此，