液相色谱质谱联用的原理.ppt

汇报人：XXX 2015-12-18 液相色谱—质谱联用技术 简 介 液质联用（LC-MS）又叫液相色谱-质谱联用技术，它以液相色谱作为分离系统，质谱为检测系统。样品在质谱部分和流动相分离，被离子化后，经质谱的质量分析器将离子碎片按质量数分开，经检测器得到质谱图。 LC-MS除了可以分析气相色谱-质谱（GC-MS）所不能分析的强极性、难挥发、热不稳定性的化合物之外，还具有以下几个方面的优点：分析范围广、分离能力强、?定性分析结果可靠、检测限低、分析时间快、自动化程度高 液质联用与气质联用的区别: 气质联用仪(GC-MS)是最早商品化的联用仪器，适宜分析小分子、易挥发、热稳定、能气化的化合物；用电子轰击方式（EI）得到的谱图，可与标准谱库对比。 液质联用(LC-MS)主要可解决如下几方面的问题：不挥发性化合物分析测定；极性化合物的分析测定；热不稳定化合物的分析测定；大分子量化合物（包括蛋白、多肽、多聚物等）的分析测定；没有商品化的谱库可对比查询，只能自己建库或自己解析谱图。 LC-MS由以下几部分组成 数据及供电系统 ┏━━━━┳━━━━━╋━━━━━━┓ 液相色谱 接口 质量分析器 检测接收器 （离子源 ） ┗━━━━━╋━━━━━━┛ 真空系统 真空系统 * 质谱仪的离子产生及经过系统必须处于高真空状态。若真空度过低，则会造成离子源灯丝损坏、本底增高、图谱复杂化、干扰离子源的调节、加速极放电等问题。 一般质谱仪都采用机械泵预抽真空后，再用高效率扩散泵连续地运行以保持真空。现代质谱仪采用分子泵可获得更高的真空度。 离子源 * 离子源的作用是将欲分析样品电离，得到带有样品信息的离子。 1.质谱检测的是离子 2.离子源=接口 * ESI是近年来出现的一种新的电离方式。它主要应用于液相色谱-质谱联用仪。流出液在高电场下形成带电喷雾，在电场力作用下穿过气帘；从而雾化、蒸发溶剂、阻止中性溶剂分子进入后端检测。 电喷雾电离（ESI） * 　 ESI是一种软电离方式，即便是分子量大，稳定性差的化合物，也不会在电离过程中发生分解，它适合于分析极性强的有机化合物。 ESI的最大特点是容易形成多电荷离子。目前采用电喷雾电离，可以测量大分子量的蛋白质。 大气压化学电离源(APCI) * APCI喷嘴的下游放置一个针状放电电极，通过放电电极的高压放电，使空气中某些中性分子电离，产生H3O+，N2+，O2+ 和O+ 等离子，溶剂分子也会被电离，这些离子与分析物分子进行离子-分子反应，使分析物分子离子化。 Corona Nebulizer APCI HPLC inlet + + + + + * APCI主要用来分析中等极性的化合物。有些分析物由于结构和极性方面的原因，用ESI不能产生足够强的离子，可以采用APCI方式增加离子产率，可以认为APCI是ESI的补充。 APCI主要产生的是单电荷离子，很少有碎片离子，主要是准分子离子。 　 电喷雾与大气压化学电离的比较 电离机理：电喷雾采用离子蒸发，而APCI电离是高压放电发生了质子转移而生成[M＋H]+或[M-H]-离子。 样品流速：APCI源可从0.2到2 ml／min；而电喷雾源允许流量相对较小,一般为0.2-1 ml／min. 断裂程度；APCI源的探头处于高温，对热不稳定的化合物就足以使其分解. 灵敏度：通常认为电喷雾有利于分析极性大的小分子和生物大分子及其它分子量大的化合物，而APCI更适合于分析极性较小的化合物。 多电荷：APCI源不能生成一系列多电荷离子 质量分析器 * ◆ 质量分析器是质谱仪的核心, 质量分析器的作用是将离子源产生的离子按m/z顺序分开并排列。 ◆ 不同类型的质量分析器构成不同类型的质谱仪。 ◆ 不同类型的质谱仪其功能，应用范围，原理， 实验方法均有所不同。 单聚焦磁场分析器 * 在一定的B、V下，不同m/z 的离子其R不同，由离子源产生的离子，经过分析器后可实现质量分离。 离子进入分析器后，由于磁场的作用，其运动轨道发生偏转改作圆周运动。其运动轨道半径R可由下式表示： 上式中， m -离子质量 Z -离子电荷量 V -离子加速电压