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第二章 微生物的纯培养和显微技术 第一节 微生物的分离和纯培养 一 无菌技术 2 无菌接种操作 二 用固体培养基获得纯培养 1 平板培养 2 斜面培养 第二节 显微镜和显微技术 一 显微镜的种类及原理 普通光学显微镜 二 显微观察样品的制备 光学显微镜的制样 染色观察 本章思考题 1 菌膜 菌体在培养液中生长繁殖时， 在液体表面形成的一层薄膜 2 菌环 菌体在培养液中生长繁殖沿 试管壁液体表层形成的环状 3 沉淀、混浊 ※ 微生物在液体培养基中的生长状态 液体培养基中 沉淀生长 混浊生长 表面生长 在显微镜下用显微操纵器（单细胞挑取器）进行。 四 单细胞（孢子）分离 五 选择培养 选择平板培养： 加牛奶或酪素，筛选蛋白酶产生菌。 加抗菌素筛选抗性菌株。见书P18。 富 集 培 养： 制定特定的培养环境条件，仅适合 分离微生物的生长，使其大量繁殖。 从土壤分离能降解对羟基苯甲酸的微 生物。见书P18。 富集培养是微生物学研究重要的技术手段！ 可分离培养出由科学家设计的能在特定环境中生长的微生物！ 显微 观察效果 显微镜自身特点 操作者技能 放大倍数 分辨率 反差 显微镜使用 标本制作 观察技术 一 显微镜的种类及原理 二 显微观察样品的制备 普通光学显微镜 暗视野显微镜（视野暗，样品亮。细菌运动） 相差显微镜（不染色观察细微结构） 荧光显微镜（黑暗时荧光素吸收紫外线放出可见光） 电子显微镜 机械装置——镜座、支架、载物台、调焦螺旋 普通光学显微镜 光学系统——物镜、目镜、聚光器 目镜 镜体 物镜转换器 物镜 载物台 粗调节旋扭 细调节旋扭 臂 物镜： 低倍镜 高倍镜 40X 油镜 100X 聚光器 光源 分辨率——辨别两点之间最小距离的能力。 最小可分辨距离= 0.5λ ηsinθ η.sinθ又叫数值孔径NA。 显微镜的数值孔径与镜口角及工作距离间的关系 η.sinθ——数值孔径NA。 以空气做介质同以香柏油做介质的比较 η.sinθ——数值孔径NA。 低倍镜 高倍镜 油镜 (a)×500 (b)×175 (c)×210 (d)×600 (e)×100 (a) (b)暗视野显微镜观察 (c) (d) (e)相差显微镜观察 荧光显微镜观察 (a)×600 相差显微镜 (b)×100,000电子显微镜 (c)×282,000电子显微镜 (a)、(b)：一种红螺菌 (c) ：人流感病毒 细菌的扫描电镜图片×32,000 光学显微镜的制样 电子显微镜的制样 扫描电镜的样品制备 * * 第一节 微生物的分离和纯培养 第二节 显微镜和显微技术 ◇ 微生物的培养物（culture)：一定条件下培养繁殖得到的微生物群体。 ◇ 微生物的纯培养物(pure cultrue)：只有一种微生物的培养物。或定义为单个细胞或一种细胞群繁殖得到的后代。 ◇ 微生物的纯培养技术：从混杂存在的状态分离、纯化出特定的微生物的技术。 培 养 物 纯 培 养 物 纯培养技术 如何操作？ 建立纯培养，证实其纯度无可置疑并保持不受污染是微生物学家最重要的任务之一！！！ 纯培养 得到的是只含一种微生物的培养体 一 无菌技术 二 用固体培养基获得纯培养 三 用液体培养基获得纯培养 四 单细胞（孢子）分离 五 选择培养 防止实验操作过程中不被其他微生物污染，自身也不污染操作环境的技术。 实验操作过程：分离、转接、培养纯培养物等。 1 微生物培养的常用器具及其灭菌 培养皿 试管 三角瓶 塞子 灭菌（让容器内不含任何生物） 高压蒸汽灭菌锅 电热恒温干燥箱 紫外灯 最常用的基本操作。 要点： 在火焰附近熟练操作； 在无菌操作箱操作； 在无菌操作室（无菌间）操作。 接种环 接种针 无菌吸管 移液枪 超净工作台 平板培养 斜面培养 获得 培养皿 菌落（colony） 获得 试管 菌苔（lawn） 菌落概念—— 单个菌体在固体平面 培养基上生长繁殖时 形成的肉眼可见的群 体。 菌落 ※ 菌落的分类 表