环境消毒、监测与验证.ppt

1、TAMC时，如果真菌被发现生长，应该被 作为TAMC计数的一部分。 2、TYMC时，如果细菌被发现生长，应该被 作为TYMC计数的一部分。 3、当TYMC由于细菌的生长而超过了可接受 标准，应当使用含有抗生素的SDA培养基。 计数原则： 洁净室环境监测培养基的选择？（关键区域使用培养基的特殊要求） 洁净区微生物监测的动态标准 （GMP2011版） 洁净度级别 浮游菌 cfu/m3 沉降菌（?90mm） cfu /4小时 表面微生物 接触（?55mm） cfu /碟 5指手套 cfu /手套 A级 ?1 ?1 ?1 ?1 B级 10 5 5 5 C级 100 50 25 － D级 200 100 50 － CHP2010 《中国药典》2010年版 二部 附录XIX Q “药品微生物实验室规范指导原则” 用于环境监测的培养基须特别防护，最好要双层包装和终端灭菌，如果不能采用终端灭菌的培养基，那么在使用前应进行100%的预培养以防止外来的污染物带到环境中以避免出现假阳性的结果。 附录B: B.3 培养基平皿培养及保存 制备好的培养基平皿宜在2～8℃保存，一般以一周为宜或按厂商提供的标准执行。采用适宜的方法在平皿上做好培养基的名称、制备日期的标记。 GB/T 16293-2010 / GB/T 16293-2010 1、TSA 用于细菌取样。 培养温度/时间：30～35℃ 不少于2天。 2、 SDA 用于霉菌和酵母菌取样。 培养温度/时间：20～25℃ 不少于5天。 环境测试培养基： 3、用户认可并验证了的培养基。 以上摘自：GB/T 16293-2010 GB/T 16294-2010 环境测试培养基： 1、忽视洁净环境中的影响因素 2、忽视培养基的选择 环境监测中常忽视的两个方面： （1）API 的残留 （2）消毒剂/杀孢子剂的残留 1、忽视洁净环境中的影响因素 抗菌素 药物活性成分 API 消毒剂/杀孢子剂 常见的化学消毒剂： 1、酚类 2、醛类 3、过氧化氢类 4、季胺盐类化合物 5、以上混合物 （1）选择性低下，营养全面 （2）含有中和剂 （3）“无菌”平板培养基 2、忽视培养基的选择 营养琼脂 胰蛋白胨大豆琼脂（TSA） 培养基的选择 参见：“中国药典”2010年版 附录109页 附录XI J 表1： “常见干扰物中和剂或灭活方法” 中和剂的使用： 青霉素酶（ β-内酰胺酶） 可以有效的水解β-内酰胺类抗生素。 包括： - 青霉素G - 氨基青霉素类，如氨苄西林、阿莫西林、匹氨西等 - 羧基青霉素类，如羧苄西林、替卡西林等 - 脲基青霉素类，如呋苄西林、美洛西林等 - 头孢Ⅰ、Ⅱ 酶（1）：青霉素酶 头孢菌素酶 可以有效水解头孢类抗生素Ⅲ及以上的头孢类 抗生素。  包括：头孢羟氨苄、头孢拉定、头孢克洛、头孢呋辛、 头孢克肟、头孢哌酮、头孢噻肟、头孢曲松等。 酶（2）：头孢菌素酶 抵抗消毒剂的中和剂： 1、吐温-80 能够消除六氯酚和含汞类消毒剂的影响。 2、卵磷脂 能够消除洗必泰类消毒剂的影响。 3、卵磷脂、吐温-80 能够消除季胺类化合物（苯扎溴铵、苯扎 氯铵等）消毒剂的影响。 无菌平板培养基 （预灌装无菌培养基） 理想的环境测试培养基： 1、A级、B级、C级洁净区直接使用 2、室温储存 3、有效期长 4、无菌包装、包装完整 5、特制平板 6、培养基灌装量大 无菌平板培养基优点： 55mm接触平板（Rodac Plate） Replicate Organism Detection and Counting GMP2011和 EU GMP: - 平板尺寸：15 X 55 mm - 取样单位面积：25cm2 接触板的取样面积： 24～30cm2 USP〈1116〉 洁净室和其它控制环境的微生物评估 取样面积：不小于20cm2 。 取样方法： 采样时培养基表面应与采样点接触不少于10s，向整个接触表面施加恒定均匀的压力（如施加的质量约为25g/cm2），不得有环形或线性运动，装置有接触并拿开后，要加盖并尽快用适当的培养条件培养。 ISO 14698 洁净室及其相关控制环境 目前各类官方的指导原则中，很少有对洁净环境微生物监测方法提出要求的。 目前各类官