现代分离技术实验报告.doc

课程： 现代分离技术实验报告 班级：应化134班 学号：2013015054 姓名：聂晓迪 实验名称：金银花中绿原酸的提取与分离 关键字： 金银花 绿原酸 薄层色谱 索氏提取器 柱层析 摘要： 通过索氏提取器从金银花中提取绿原酸，利用减压浓缩、柱层析、紫外检测技术，薄层色谱对绿原酸进行分析，检测。 一、实验背景 金银花是人医临床常用的有代表性的清热解毒药,具有抗菌、消炎、解热、保肝、止血、免疫调节、降血脂、兴奋中枢等多方面的药理学作用，能改善放、化疗所致的白细胞降低，有“中药中的青霉素”的美誉。另外，金银花还被广泛地应用于保健品、化妆品、卷烟、食品等行业。金银花抗菌的有效成分主要是绿原酸和异绿原酸，并且常以绿原酸含量的高低来评价金银花质量的优劣。采用超声波法和索氏法均能较好地从金银花中提取绿原酸。本实验中采用索氏提取法。 实验目的 (1)掌握渗滤、回流提取、索氏提取等天然生物活性成分的一般提取方法； （2)掌握制作薄板及薄板层析、色谱分离、重结晶等天然生物活性成分的一般分离与纯化方法； （3）熟悉天然生物活性成分的一般定性检测方法。 （4）培养动手能力和分析及解决实际问题等综合能力。 三、实验原理 绿原酸是一种含羟基和邻二酚基的有机酸，极性与乙醇相近。因此根据“相似相溶”原理，含有乙醇的溶剂更容易有效的提取绿原酸。由于乙醇溶剂的扩散‘渗透作用逐渐通过金银花细胞壁渗入到细胞内，溶解了绿原酸，而造成细胞内外绿原酸的浓度差，于是细胞内的绿原酸溶液不断向外扩散，乙醇溶剂不断进入金银花中，如此不断往返，就可以把绿原酸近于完全溶出或大部分溶出。 实验主要用品 (1)材料:金银花（为金银花花蕾和开放花的混合样品，经烘房烘干后，备用。） (2)试剂:本实验所用有机、无机试剂均为分析纯。 薄层层析硅胶：GF254和硅胶G，化学纯 柱层析硅胶：硅胶G（粒度100-200目） (3)主要仪器：旋转蒸发仪、电热恒温鼓风干燥箱、三用紫外仪、电子分析天平、高效液相色谱仪。 绿原酸物理性质 名称 分子式 分子量 性状 熔点 溶解度 绿原酸 C16H18O9 345.30 半水化合物为针状晶（110℃变为无水化合物） 208℃ 水中4%，在热水中溶解度更大，易溶于乙醇、丙酮和甲醇等极性溶剂，难溶于氯仿、苯、乙醚等亲脂性有机溶剂 结构式： 实验装置图 图一 索氏提取器 图二 旋转蒸发仪 薄层色谱 七、实验步骤与现象 1.索氏提取器对绿原酸的提取： (1) 金银花粗粉称取50g，用滤纸做成筒状嵌入提取器中，用75%乙醇采用索氏提取器回流处理4h（9点-13点10分），发生虹吸36次。提取器内液体颜色逐渐由深墨绿色变为浅黄绿色，烧瓶内液体颜色越来越深，逐渐变为墨绿色。 （2) 取其提取液在旋转蒸发仪中进行减压浓缩，温度设置为45℃，浓缩得浸膏，呈褐绿色。 2.TLC板的制备与活化： （1）在干净的研钵内加入约6g硅胶GF254，在轻轻研磨的同时缓慢加入15ml 0.5%羧甲基纤维素钠水溶液。继续研磨约10min，当体系粘稠度适宜时，即可进行铺板。 （2)用药匙将适量糊状物均匀摊在干净干燥的载玻片上，然后用手拿住薄板的一端在台面上轻轻振动，直至薄层均匀为止。将铺好的薄板平放在水平的台面上，凉干。 (3)将凉干后的薄板放入预先恒温到105～110℃的烘箱中活化30min。 绿原酸的分离 （1）粗分离：取一定量浸膏，按1∶1加入200-300目硅胶拌样，晾干。 （2）用乙酸乙酯湿法装柱（硅胶200-300目），干法上样，柱体用乙酸乙酯约300ml先进行洗脱，直到柱体褐色基本褪去；然后用乙酸乙酯-甲酸-水（20∶1∶0.1）、乙酸乙酯-甲酸-水（10∶1∶0.1）、甲醇洗脱。流速控制在每1/10柱体积即可。分部收集，每管40ml，均装在小烧杯里，时时点板采样，看在紫外灯下是否有明显荧光斑点显现。 (3) 对有斑点的烧杯中液体进行TLC分析：用事先活化好的薄层板对每管收集液进行TLC分析，点样数视板的大小而定，每两斑点之间最小间距不少于8mm，自己实验过程中将右侧第一个点为绿原酸对照点。等展开剂（组成较易挥发，注意小心保存）爬行到板层4/5～5/6高度时，取出薄层板，平放在桌面上，让溶剂挥发干。然后将薄板置于波长365nm紫外灯下下，观察和记录薄板上斑点的分布情况及