《牛乳中雄激素的测定》标准文本.doc

前 言 本标准按照 GB/T 1.1-2009GB/T 20001.4-2001 给出的规则起草 牛乳中雄激素的测定 1 范围 本标准规定了牛乳中雄激素的气相色谱-质谱方法。 本标准适用于牛乳中雄激素的测定。 本标准方法检出限为：0.1 mg/kg。 规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的必威体育精装版版本。凡是不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本适用于本标准。 GB/T 603　化学试剂 试验方法中所用制剂及制品的制备 GB/T 6682　分析实验室用水规格和试验方法 原理 试样用乙酸乙酯提取，冷冻离心脱脂净化，气相色谱-质谱仪检测，外标法定量。 试剂 水为GB/T 6682规定的一级水。 4.1 乙酸乙酯。 甲醇色谱纯。 氯化钠。 4.7 乙酸钠。 4.8 乙酸-乙酸钠缓冲溶液：称取43.0 g乙酸钠，加入22 mL乙酸，用水溶解并定容至1000 mL，用乙酸调节pH值到5.2。 4.9 标准物质：睾酮、氟甲睾酮、雄烯二酮、康力龙，纯度均≥95 %。 4.10 雄激素标准液：称取标准样品精确到0.1 mg，用（4.2）定容，配成1.0 mg/mL的雄激素标准储备液。雄激素标准液：分别吸取雄激素标准储备液（4.），用经验证过的空白基质分别稀释并定容浓度为10、20、50 mg/L。现用现配。 5.1 气相色谱-质谱仪：配有EI源。 6 测定步骤 样品的预处理 称取试样5 g于50 mL具塞比色管中，加入10 mL乙酸-乙酸钠缓冲溶液（4.9），涡旋混匀，再加入β-葡萄糖醛酸酶/芳香基硫酸酯酶溶液100 μL，于37±1℃酶解12 h。加入5-7 g氯化钠，加入20 mL乙酸乙酯涡旋2 min，超声30 min，静置分层后将乙酸乙酯转移至50 mL容量瓶，残渣再萃取2次，每次加入15 mL乙酸乙酯，涡旋2 min，超声30 min，合并乙酸乙酯，残渣中再加入适量乙酸乙酯涡旋2 min，用此次涡旋后的乙酸乙酯萃取溶液定容上述50 mL容量瓶，摇匀。从容量瓶中取10 mL溶液，冷冻30 min，16000 r/min离心5 min，取1 mL经0.45 μm滤膜后待。 色谱参考条件 色谱柱：HP-5 MS，30 m×0.25 mm×0.25 μm或相当者； 载气：高纯氦气，纯度99.999%。 流速：1.0 mL/min； 进样口温度：260； 柱温：0 ℃保持min，/min升至0 ℃，保持； 进样量：1.0 μL。 溶剂延迟时间：5 min；接口温度：280； 名 称 保留时间 定量离子 定性离子 雄烯二酮 26.91 286 244/229 睾酮 27.04 288 246/228 氟甲睾酮 29.65 336 279/225 康力龙 31.13 328 313/257 测定 6.4.1 定性测定 进行样品测定时，如果检出的色谱峰的保留时间与标准品一致，并在扣除背景的样品质谱图中，所选离子均出现，且所选离子丰度比与标准品的离子丰度比一致（相对丰度＞50 %，允许±10 %偏差；相对丰度＞20 %-50 %，允许±15 %偏差；相对丰度＞10 %-20 %，允许±20 %偏差；相对丰度≤10 %，允许±50 %偏差），则可判断样品中存在这种雄激素。如果不能判断，应重新进样，或采用其他确证离子的方式或用其他灵敏度更高的分析仪器来确证。 6.4.2 定量测定 将标准工作溶液（4）分别进样，绘制标准工作曲线，用标准工作曲线对样品进行定量，样品溶液中的雄激素均应在仪器测定的线性范围内。在上述色谱条件下，雄激素的保留时间、标准物质及样品的色谱图参见附录A。 平行实验 按以上步骤对同一试样进行平行试验测定。 结果计算 测定结果可由计算机按外标法自动计算，也可按式（1）计算： ……………………………………………（1） 式中： X—试样中的含量，单位为毫克每千克（mg/kg）； C—从标准工作曲线得到的被测组分溶液浓度，单位为毫克每毫升（mg/L）； —试样的终体积，单位为毫升（mL）； m—试样质量的数值，单位为克（g）。 附 录 A （资料性附录） 4种雄激素的总离子流图和选择离子质谱图，见图A.1- A.5。 图A.1 图A.2 的图 图A. 睾酮的图图A. 氟甲睾酮的图图A. 康力龙的图 GB/T ××××—2005 II 1 DBS22/005—2012 I 2 吉林省卫生厅 发