不同含量-亚麻酸柱色谱分离纯化的正交实验.doc

不同含量-亚麻酸柱色谱分离纯化的正交实验 薛刚1 刘凤霞2 黄开勋1 高伟霞2 张立华3 （1.华中科技大学，湖北 武汉 430074； 2.南阳理工学院生物与化学工程系，河南 南阳 473004；3.河南南阳普康药业有限公司 河南 南阳 473004） 摘 要：目的 通过正交试验优选纯化不同含量-亚麻酸、固定相的粒度、流动相配比和色谱的次数。方法 正交试验设计。结果 柱色谱分离法能使-亚麻酸含量提高到90%以上。结论 正交试验最佳的组合为A4B1C2D1，即-亚麻酸的含量为75%，硅胶的粒度为100-200目，氯仿：甲醇为100：0，色谱次数为1次。 关键词：—亚麻酸 柱色谱 正交实验 Column Chromatography to Purify Different γ－Linolcnic Acid Orthogonal Test XUE Gang1 ，LIU Feng-xia2， HUAN Kai-xun1，GAO Wei-xia2 ，ZHANG Li-hua3 Huazhong University of Science Technology, Hubei Wuhan 430074； 2. Nanyang Institute of Technology, Henan Nanyang 473004； 3. Henan Nanyang Pukang medicine co.ltd., Henan Nanyang 473004） Abstract: Object by Orthogonal tests to purify -Linolcnic acid’s best fixed size flowing matching and layer times. method The design of orthogonal tests. Result to purifyγ－Linolcnic acid, to let its content reach synthetic double highγ－Linolcnic acid’s purification 90% .Conclution That the optimal conditions of the column chromatography orthogonal test is A4B1C2D1. that is , purify is 75%, the size of the silica gas is 100-200. Trichloromethane :methyiaicohol is 10:1. The times is 1. Key words: γ－Linolcnic acid, Column Chromatography, orthogonal test 富集月见草油中-亚麻酸的方法主要有有机溶剂萃取法、银离子树脂色谱法、真空精馏法、冷冻结晶法、尿素包合法及超临界CO2等萃取法等（1），国内主要采用尿素包合法（2），或是从月见草油中分离高浓度-亚麻酸甲酯（3），这些研究中也采用了低温结晶法而含量只有30-50%，真空分馏法含量为80%，从资料中显示含量都在50-80%之间，因为国内合成前列腺E1是以二高-亚麻酸为原料，二高-亚麻酸又是以月见草油中的-亚麻酸为前提物质，且只有含量大于90%的-亚麻酸才可以合成较高含量的二高-亚麻酸。采用银离子树脂色谱法可以提高含量，但会在分离过程中有银离子，对制药不利。因此采用硅胶柱色谱法是我们本次研究的主要目的。 1 仪器和材料 GC—14B气相色谱仪（日本岛津），色谱柱，硅胶（青岛海洋化工厂），月见草油（江西），-亚麻酸（尿素包合产物-，自制），尿素（山西天脊化工股份有限公司），酒精（河南天冠），氯仿，石油醚，甲醇等均为分析纯。 2 方法和结果 2.1 -亚麻酸含量测定 2.1.1 色谱条件：色谱柱：L=300m长的毛细管柱，PEG-20m极性柱，温度：230℃，进样口250℃，检测器280℃，压力：N2140KPa，H270 KPa，空气50 Kpa。 2.1.2 样品处理：取-亚麻酸0.1g置于10 ml具塞试管中，加入0.5mol/l的KOH甲醇溶液2 ml于63℃水浴上皂化20 min，加入BF3-乙醚溶液(V：V=1：1)0.2ml，63℃水浴上甲酯化5 min，取出冷水冷却，加入2ml石油醚，振摇，吸取上层2ul进样，按面积归一法计算。 2.2 柱色谱分离方法 称取硅胶100克，120℃活化1.5小时，加入等体积的氯仿，摇匀。取二支色谱柱（2cm×40cm），各先加20ml氯仿，然后加入硅胶，轻轻敲打装完后垫上一层滤纸，加