生物化学检验实验.doc

临床生物化学实验 实验一 实验室基础知识 ????一、现代化学试剂及玻璃器械的使用 ????实验目的： ????l、了解化学试剂的等级和保管原则 ????2、掌握玻璃器械的规范使用 ????3、明确各玻璃器械的功用 ????实验材料：不同等级的化学试剂量材 量筒 容量瓶 吸管（移液管 无分度两标线管 有分度吸管 微量吸管）吸球 ????实验步骤： ????1、根据试剂瓶上的标志说明该试剂的等级及保管方法 ????2，玻璃量器的使用：按照玻璃量器上的标示，分量入式及量出式量取一定量的液体5次以上，达到熟练使用，注意吸液时的刻度的读取及量液时角度。 ????二、恒重法校正移液管 ????实验目的；掌握恒重法校正玻璃量具 ????实验器材：万分之一天平纯水 移液管 温度什 移液瓶 ????实验原理：Vt＝Wt/dt ????实验步骤： ????1、调整万分之一天平。 ????2、用被检的移液管取20ml水，注入已称量质量的移液瓶中。 ????3、称量总质量，得出水质量 ????4、用温度计测量水温，确定该温度下的水密度。 ????5、计算水体积。 ????6、计算称量误差，确定是否在允许范围之内。 实验二　无蛋白血滤液制备 ????实验目的：掌握无蛋白血滤液制备的方法 ????一、钨酸法 ????实验原理：钨酸钠与硫酸混合，生成钨酸，钨酸可以与血液中蛋白质结合生成蛋白质盐沉淀，经离心将蛋白质除掉。 ????实验试剂： 1、100g/L钨酸钠溶液：称取钨酸钠100g，溶于水中加水至1000ml 2、1/3M硫酸：取己标定的当量硫酸2份加水1份混合。 实验操作： ????用吸管将全血缓慢放入蒸馏水中，每次加入试剂后充分混匀，静止10分钟后离心，取上清液备用． 注意事项： ????1、抗凝血中草酸盐过剩时，蛋白质沉淀不完全，沉淀不能变为暗褐色，此时可滴加100g/L硫酸一滴，摇匀，至沉淀变为暗褐色再进行过滤。 ????2、除蛋白滤液不透明时，应将蛋白质沉淀及滤液倾回试管，按1所示方法加人硫酸，使蛋白质完全沉淀。 ????3、此滤液适于葡萄糖、肌酐、肌酸、尿酸等测定． ????二、三氯醋酸法 ????实验原理：血液中蛋白质能与三氧醋酸作用于生成不溶性的蛋白质盐沉淀，经离心将蛋白质除去，上清液为无蛋白血滤液． ????实验试剂：100 g／L三氯醋酸溶液 ????实验操作：取血清或血浆一份，三氯醋酸9份，加入血清或血浆中（边加边摇）．充分混匀后离心，取上法备用． ????注意事项： ????1、此法所得滤液量多，酸性较强，适于较强酸性溶解的物质定测定，如钙、磷等。 ????2、不适于碱性还原法血糖定量测定。 ????3、三氯醋酸易潮解，注意保存． 实验三　吸收曲线的制作和721波长的校正 ????实验目的： ????l过硫酸铜和镨铷滤光片的吸收曲线的测绘，了解分光光度计波长度盘上标度的正确性． ????2、掌握721分光光度计波长校正方法（镨铷滤光片法）及重复性检查． ????实验原理：镨铷滤光片在可见光区域最大吸收峰为529nm，利用这个特性校正721分光光度计． ????实验器材：721分光光度计 镨铷滤光片 坐标纸 烧瓶 吸管硫酸铜标准储存液 血清总蛋白测定液 ??实验步骤： ????一、校正 ????1、预热仪器 ????2、置波长580nm处，T?％调至最大，用一白纸条观察是否有光强均匀的光斑在吸收池处出现，调节光源灯泡使用其符合要求． ????3、把灵敏度钮置于最低端，波长度盘置529nm处，反复调节透光度和100％直至稳定，将镨铷滤光片插入光路，仔细旋转波长度盘，找到T值最低点，此时波长应为529nm（λm） ????4、计算波长误差：Δλ＝λ－λmΔl=lmax－lmin。 ???????Lmax、lmin分别为透光度最大值和最小值，一般要求Δl小于0.5％ ????三、吸收曲线制作 ????1、连续测定五个不同浓度的蛋白标准液，记录其吸光度值． ????2、分别以浓度为横坐标、吸光度为纵坐标绘制吸收曲线． 实验四　血清蛋白醋酸纤维素膜电泳 ????实验原理：带电质在电场中向与其极性相反的方向流动的现象称为电泳．血清中各蛋白质都有不同的等电点，当将其置于比其等电点高的PH缓冲液中时，他们都将带负电荷在电场中向正极泳动．由于各蛋白质等电点及所带电荷量和分子量大小都有所不同，因而在电场中泳动速度不同，利用这个特点将血清中各种蛋白质分开． ????实验仪器：电泳仪电泳槽 血清加样带 分光光度计 滤纸 剪刀 ????实验材料：醋酸纤维素膜规格2×8cm。 ????实验试剂： ??????l、巴比妥－巴比妥钠缓冲液（PH8.6＋?0.1、离子强度0.06）：称取巴比妥2.21g，巴比妥钠12.369于500ml蒸馏水中，加热溶解，待冷至