课题2土壤中分解尿素的细菌的分离与计数.pptVIP

将待测样品经一系列10倍稀释，然后选择三个稀释度的菌液，分别取0.1 mL接种到已制备好的平板上，为使结果接近真实值，可将同一稀释度分别加到三个平板上 然后用无菌涂布棒将菌液涂布整个平板表面，放在适宜的温度下培养，计算出同一稀释度菌落平均数。 注意事项 ①为了保证结果准确，一般选择菌落数在30——300的平板上进行计数。 ②为使结果接近真实值可将同一稀释度加到三个或三个以上的平皿中，经涂布，培养计算出菌落平均数。 计算公式 每克样品中的菌落数＝（C÷V）×M，其中C代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数，V代表涂布平板时所用的稀释液的体积（mL），M代表稀释倍数。 某同学在稀释倍数为106 的培养基中测得 平板上菌落数的平均数为234，那么每克样 品中的菌落数是（涂布平板时所用稀释液 的体积为0.1ml） ( ) A. 2.34×108 B. 2.34×109 C. 234 D. 23.4 B 四、操作提示 无菌操作 做好标记 规划时间 结果： 酚红指示剂变_____，初步鉴定该细菌能够分解尿素 分析：细菌能分解尿素产生_____，使培养基呈碱性，氨增加pH升高，酚红由无色变为红色。 操作：在以_______为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂 尿素 （鉴别培养基） 红色 氨 5、实验结果的鉴定 测定饮水中大肠杆菌数量的方法是将一定体积的水用细菌过滤器过滤后，将滤膜放到 伊红美蓝 培养基上培养，大肠杆菌菌落呈现黑色，通过记述得出水样中大肠杆菌的数量。（鉴别培养基） 讲完第1点后讲课本P22中间楷体字内容引出2、3、4、内容 专题2 微生物的培养和应用 课题2 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数 CO（NH2）2 + H2O CO2+2NH3 脲酶 1、筛选菌株 无机盐 碳源 氮源 凝固剂 尿素是唯一氮源，只有能利用尿素的 微生物才能生长。 计数板是一块特制的载玻片，上面有一个特定的面积（1 mm2）和高（0.1 mm）的计数室， 1 mm2的面积=25个（或16）中格*16个（或25）小格（即400个小格组成。） 计数室 ②操作：将清洁干燥的血球计数板盖上盖玻片，再将稀释的样品滴在计数板上，然后在显微镜下统计5个中格中的细菌数，并求出每个小格所含细菌的平均数，再按下面公式求出每毫升样品中所含的细菌数。 ③计算公式：每毫升原液所含细菌数＝每小格平均细菌数×400×10000×稀释倍数。 （二）统计菌落数目 2.稀释涂布平板法: 应用： 统计样品中活菌的数目 原理： 当样品的稀释度足够高时，培养基表面 生长的一个菌落，来源于样品稀释液中 的一个活菌，通过统计平板上的菌落数， 就能推测出样品中大约含有多少活菌。 注意：一般选择菌落数在30-300的平板进行记数。 （三）设置对照 判断培养基中是否有杂菌污染： 将未接种的培养基同时进行培养。 判断选择培养基是否具有筛选作用： 完全培养基（营养成分齐全）接种后培养 观察菌落数目。 主要目的是排除实验组中非测试因素对实验 结果的影响，提高实验结果的可信度。 二.实验的具体操作 ㈠.土壤取样 从肥沃、湿润的土壤中取样。先铲去表层土3cm左右，再取样，将样品装入事先准备好的信封中。 ㈡.制备培养基： 制备以尿素为唯一氮源的选择培养基。 二 实验设计 （2）样品的稀释 分离不同微生物采用不同的稀释度原因：土壤中各类微生物数量不同。 (保持获得菌落数在30-300个的平板) 注意：第一次做实验，稀释范围要放宽。