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第十章 紫外－可见分光光度法 第一节 光谱分析的基本概念 微粒性 h－普朗克(Planck)常数 6.626×10-34J·s ?－频率 E－光量子具有的能量 单位：J(焦耳)，eV(电子伏特) 波粒二象性 结论:一定波长的光具有一定的能量，波长越 长(频率越低)，光量子的能量越低。 单色光：具有相同能量(相同波长)的光。 复合光：具有不同能量(不同波长)的光复合在 一起。 分子吸收光谱的产生 第二节 紫外-可见分光光度法基本原理 一、透光率和吸光度 二、光吸收基本定律: Lambert-Beer定律 T－透光率（透射比）（Transmittance） 吸光度A、透射比T与浓度c的关系 K 吸光系数 Absorptivity 吸光度与光程的关系 A = ?bc 吸光度与浓度的关系 A = ?bc 朗伯-比尔定律的适用条件 单色光 应选用?max处或肩峰处测定 2. 吸光质点形式不变 离解、络合、缔合会破坏线性关系 应控制条件(酸度、浓度、介质等) 3. 稀溶液 浓度增大，分子之间作用增强 三、测量条件的选择 1.波长:一般选最大吸收波长 2.控制适当的吸光度测量范围 浓度越大,由不纯的单色光引起的对比耳定律的偏离越大. A在0.2~0.7范围内,由透光度读数误差引起的浓度误差小. 第五节 紫外分光光度法简介 751-G型分光光度法 第五节 紫外分光光度法简介 751-G型分光光度法 3. 吸收光谱 4. Lamber-Beer定律的适用条件 二、测量条件的选择 仪器测量条件 显色反应条件 A 0.2~0.7 λMax 显色剂用量 显色反应PH 显色时间温度 参比溶液 溶剂空白 试剂空白 试样空白 三、定量测定 单组分测定 多组分测定 例 已知含Cd2+140?g?L-1的溶液，用双硫腙比色测定镉，比色皿厚度为2cm，在波长520nm处测得吸光度为0.220，计算摩尔吸光系数。 解：Cd的原子量为112.4，则 C Cd2+ = 140×10-6 112.4 =1.24×10-6mol·L- A=εbc ε =A/bc ε= 0.220 2×1.24×10-6 =8.87×104 L·mol-1cm-1 光源 检测器 0.00 吸光度 检测器 b 样品 光源 0.22 吸光度 光源 检测器 0.44 吸光度 b 样品 b 样品 吸光度 0.00 光源 检测器 吸光度 0.22 光源 检测器 b 吸光度 0.42 光源 检测器 b ?x104 ?(nm) 亚甲蓝阳离子水溶液的吸收光谱 a. 6.36×10-6 mol/L b. 1.27×10-4 mol/L c. 5.97×10-4 mol/L 亚甲蓝阳离子 单体 ?max= 660 nm 二聚体 ?max= 610 nm 二聚体的生成破坏了A与c的线性关系 单组分的定量测定 A＝ ?bc 三、朗伯-比尔定律的应用 1.吸光系数法 2. 标准曲线法 用标准品配制一系列标准溶液 作吸收光谱曲线,找出最大吸收波长 作标准曲线 测样品吸光度并在标准曲线上查浓度 计算 0 1 2 3 4 mg/ml A 。 。 。 。 * 0.8 0.6 0.4 0.2 0 标准曲线 3.标准对照法 测量与被测液浓度相近的标准溶液的As 相同条件测量试样的吸光度A CX = AX AS CS 多组分的定量测定 如果溶液中含有不止一种吸光物质，可以利用吸光度的加合性，即总吸光度等于各吸光组分吸光度之和，不经分离同时测定。 设a b为溶液中的两种吸光组分，视其吸收光谱的重叠情况采用不同的方法。 1.二组分吸收光谱不重叠 a b λ1 λ2 分别在λ1测定a , λ2 处测定b ,互不干扰. A 2.吸收光谱单向重叠 λ1 λ2 a b 在λ1测定a 的浓度 , b不干扰. λ2 处测定溶液的总吸光度A2a+b ,根据吸光度的加合性测定b的浓度. A2a+b = A2a + A2b = ε2a ca + ε2b cb ε2a ε2b 已知,液层厚度为1cm A Cb= A2a+b - ε2a ca ε2b 3.吸收光谱彼此重叠 λ1 λ2 a b A A1a+b =ε1a ca + ε1b cb A2a+b =ε2a ca + ε2b cb 用已知浓度的纯溶液测得ε1a , ε1b, ε2a , ε2b, 即可求ca 、cb 第三节 紫外可见分光光度法 一、分光光度计 光源