2011年执业药师药学专业知识药物分析部分教材考点(第六章).docVIP

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  第五章 分光光度法   v 分光光度法是通过测定被测物质在特定波长处或一定波长范围内的吸光度或发光强度,进行定性、定量分析的方法。   §1. 紫外-可见分光光度法   紫外光区 200-400 nm;可见光区 400-760 nm。   紫外-可见吸收光谱:物质吸收紫外和可见光区的电磁波而产生的吸收光谱   跃迁:物质分子的价电子吸收了光的能量,由低能量的基态转变为高能量的激发态的过程。   跃迁发生的条件:光子所提供的能量与跃迁所需能量相当。   不同结构的物质分子能级差不同,(吸收的能量不同)电子跃迁不同,可产生不同紫外-可见吸收光谱,可进行定性分析——鉴别的依据。   一、 基本原理   1.光的吸收定律Lambert-Beer定律 ——吸收光谱法的基本定律   一定浓度范围内,一定条件下,被该物质吸收的光量(吸光度A)与该物质溶液的浓度(C)和液层厚度(L)成正比: —— 药物定量测定的依据   ★★ A = -lg ( I/I0 )= - lg T = E?C?L   物质分子对特定波长的光的吸收程度与分子的结构、溶液浓度、液层厚度(光路长度)有关。   2.吸收系数   1)A = E?C?L公式中,E为物质的物理(特性)常数。E越大,说明物质对某波长的光的吸收能力越强   \E?定性、定量依据。   2)两种表示方法:C单位为“mol/L” 时,E为摩尔吸收系数,用e 表示;   当C用“g/100ml”为单位时,E为比吸收系数或百分吸收系数,用E1%1cm表示。   3)E1%1cm的物理意义:吸光物质C为1% ,L为1cm时,在一定条件下(波长、溶剂、温度一定)测得的吸光度A。   二、紫外-可见分光光度计   (一)基本结构:   光源 紫外:氘灯或氢灯;可见: 钨灯或卤钨灯   单色器 色散元件(光栅或棱镜);狭缝   吸收池 紫外: 石英; 可见: 玻璃, 石英   检测器 光电池、光电管、光电倍增管、光二极管阵列检测器   数据记录和处理   (二)仪器的校正和检定   (1) 波长的校正 汞灯或氘灯的特定谱线为参照或钬玻璃的特定波长   (2)吸光度的准确度检定 用重铬酸钾的硫酸溶液   (3)杂散光的检查 一般来源于光学仪器表面的瑕疵   三、 吸光度的测定要求   1. 溶剂 应符合规定   2. 作空白试验校正 目的:消除溶剂和吸收池的影响   3. 测定波长的检查 一般以吸光度最大的波长 max为测定波长,吸收峰的波长应在该品种规定波长的±2%以内,否则应考虑供试品的真伪、纯度及仪器波长正确性。   影响波长检查结果的条件有:供试品的真伪与纯度、溶剂的种类 、仪器波长的正确性   4. 供试品溶液浓度 使吸光度在0.3-0.7范围内   5. 仪器狭缝宽度的选择 调至供试品溶液的吸光度不再增加为止   ??四、应用   (一)鉴别 《中国药典》所采用方法:   1. 核对吸收光谱的特征参数:最大吸收波长lmax,吸收系数E1%1cm;吸光度 A   2. 比较吸光度比值: Al1 /Al2?El1/El2   3. 比较吸收光谱的一致性   (二)杂质检查:   依据:药物与杂质的结构不同,故吸收光谱也不同。   1. 药物在紫外可见光区没有明显吸收,所含杂质有较强吸收??少量杂质可用光谱检索出来。   2. 药物有较强吸收;杂质无吸收或很弱?E(e)ˉ 或杂质有更强吸收?? E(e)   规定吸光度的上下限可在一定程度上控制杂质的量   (三)含量测定:   紫外分光光度法用于含量测定的方法有三种:前三种方法   (1)对照品比较法: AR/AX=ECRL / ECXL =CR/ CX T CX=(AX/AR)CR?     供试品溶液与对照品溶液浓度C及测定条件应一致,E、L相等   (2)吸收系数法(绝对法):   ???? A=E1%1cm CL TC=A/(E1%1cmL)   对仪器须进行严格的校正和检定(波长的准确度、狭缝宽度符合要求),否则影响准确度   (3)计算分光光度法 如双波长分光光度法、导数光普法   主要用于消除样品中干扰组分的干扰   (4)比色法(属于可见分光光度法) 显色剂显色后测定   §2. 荧光分析法   一、基本原理   (一)荧光的产生:某些物质受紫外光或可见光照射激发后,能发射出比激发光波长更长的荧光;除去激发光源,荧光立即熄灭。   荧光的能量小于激发光的能量,波长则长于激发光。   (二)荧光光谱   荧光激发光谱??荧光的激发光波长为横坐标;发射光强度为纵坐标   荧光发射光谱??激发光波长和强度不变,荧光物质的不同荧光波长为横坐标;发射光强度为纵坐标   激发光波长、强度不变,测定用溶剂、温度等条件一定时,荧光强度与物质浓度成正比

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