CD146在结直肠癌中的表达和其临床意义.doc

CD146在结直肠癌中的表达及其临床意义 秦皇岛市第四医院病理科：康文喜 岳秀杰 韩胜春 ［摘要］目的 探讨血管内皮标志物CD146在结直肠癌中的表达及临床意义。方法 用免疫组织化学染色（SP三步法）和流式细胞仪检测法联合检测200例结直肠癌组织CD146的表达情况，分析结直肠癌不同分期、不同分化程度以及与转移和判断预后的关系。结果 免疫组化法：CD146在结直肠癌组织中的表达呈强（+），MVD计数：结直肠癌组织CD146 为30.73±7.15，正常结直肠组织CD146 为2.88±0.50（P＜0.05）；流式细胞术检测法： CD146+在结直肠癌组织中表达为21.37±4.79%，正常结直肠组织中表达为5.73±1.99 P＜0.05，两种检测方法均显示，结直肠癌组织中的CD146的表达明显高于正常大肠组织，而且在结直肠癌不同的Dukes分期、不同分化程度中，CD146的表达亦有显著差异，（P＜0.01），结果有统计学意义。结论 免疫组化法和流式细胞仪检测法联合检测结直肠癌患者组织中CD146的表达可能是判断结直肠癌患者转移及预后的重要指标。 关键词： CD146 流式细胞仪 结直肠癌 免疫组化SP法 肿瘤的生长和扩散转移与肿瘤本身微血管的生成和数量增加密切相关。无论是原发肿瘤还是继发或转移性肿瘤，在生长扩散过程中都依赖于自身的血管。CD146参与肿瘤新生血管的生成，为肿瘤的生长和转移提供必要的物质基础。CD146配体能和肿瘤细胞结合，粘附于血管内皮，并介导肿瘤细胞穿过血管向周围组织侵犯。因此，CD146是一种新发现的研究肿瘤的重要抗体。本文收集结直肠癌200例，利用CD146标记癌组织内的血管内皮细胞，观察癌组织内新生血管的变化并计算MVD值，利用流式细胞检测仪检测癌细胞悬液CD146的表达情况，研究CD146在结直肠癌发生、发展及预后判断中的重要价值。 1.资料和方法： 1.1 临床资料 本文收集我院2008年3月-2010年12月外科手术切除结直肠癌标本200例。其中男性146例，女性54例，年龄27~79岁，平均年龄49岁。200例中，结肠98例、直肠102例，同时取同源的正常大肠组织作对照。巨检：200例中，隆起型36例、溃疡型75例、浸润型46例、胶样型43例。每例标本取组织块10-15块不等。组织学分型：高分化腺癌 115例，中分化腺癌65例，低分化腺癌20例。有淋巴结转移者124例，无淋巴结转移者76例。Dukes分期：DukesⅠ期13例、 DukesⅡ期63例、 DukesⅢ期124例。 1.2 主要试剂 流式细胞检测所用的鼠抗人CD105-FITC、CD146-PE 、 CD45-PC5单克隆抗体购自美国贝克曼公司。免疫组化SP试剂盒均购自北京中杉公司。 1．4 方法 所有组织块均采用10%福尔马林固定，常规石蜡切片，HE、免疫组化染色，普通光学显微镜观察。免疫组化采用SP三部法，在血管内皮细胞膜或胞浆中表达阳性呈棕黄色颗粒。MVD 计数方法参照 Weidener 校正方法并作修改【2】。阳性显色的单个内皮细胞或细胞团, 不管有没有形成管腔, 只要与周围的微血管、肿瘤细胞和其它连接组织有一个清楚的界限, 都认为是一个可计数的微血管，而有平滑肌壁及管腔直径约＞ 8 个红细胞直径的血管需排除在外。在微血管最多的区域计数3个不同高倍镜视野下微血管数取其平均值，微血管数≥3个判断为阳性。流式细胞仪检测：取手术后大肠癌组织和同源的正常组织分别制备成单细胞悬液，调节细胞数为1X106，分别加入CD105-FITC、CD146-PE各10ul避光孵育15min，加入2mlPBS1500转离心沉淀5min洗2次，弃上清，混均后加入适量PBS上机检测。 1.5统计学处理 所有数据均采用SPSS13.0 差异＜0.05有统计学意义。 2.结果： 2.1 CD146在结直肠癌组织及正常肠壁组织中均有表达，但结直肠癌组织中表达数量增多，阳性表达的血管内皮细胞可为单个细胞，亦可几个细胞连接成条索状或团状，大部分阳性表达的血管结构不完整，管腔不规则，少数区域可见圆形或椭圆形血管腔。正常肠壁组织中血管表达数量少，血管结构大多数较完整，呈圆形、长条形，不规则形。结直肠癌中MVD值： CD146 30.73±7.15，正常肠组织 CD146 2.88±0.50 。流式细胞检测值：结直肠癌组织 21.37±4.79、正常肠组织5.73±1.99。 表Ⅰ 结直肠癌组织与正常肠组织免疫组化与流式细胞检测结果的比较 组 别 免 疫 组化 流式细胞检测 CD146 CD105+ CD146