dd毛囊bulge干细胞培养方法比较研究.pdf

华西口腔医学杂志 第27 卷 第6 期 2009 年12 月 -660 - West China Journal of Stomatology Vol．27 No.6 Dec.2009 [文章编号] 1000－1182 （2009）06－0660-05 毛囊bulge干细胞培养方法的比较研究 ， 1 1 1 1 2 董刚 汪成林 彭栗 叶玲 （1. 口腔疾病研究国家重点实验室， 四川大学； 2. 四川大学华西口腔医学院 牙体牙髓病教研室， 四川 成都 610041 ） [摘要] 目的 通过对限定性角质形成细胞无血清培养基（DK-SFM）和3T3滋养层培养毛囊bulge干细胞的比较，寻 求既能方便获得大量毛囊bulge干细胞，又能减少其分化的理想培养条件。方法 采用DK-SFM和3T3滋养层分别培 养毛囊bulge干细胞，通过倒置显微镜观察毛囊bulge干细胞的形态，免疫荧光染色检测毛囊bulge干细胞的特异性标 记细胞角蛋白19 （CK19）和分化相关抗体群34 （CD34）的表达鉴定毛囊bulge干细胞。通过比较2种方法培养的毛囊 bulge干细胞的克隆形成率和CD34阳性率的差异，分别比较毛囊bulge干细胞的增殖能力和干细胞的数量，综合评估 2种培养方法的优劣。结果 倒置显微镜观察2种培养方法所得毛囊bulge干细胞均为铺路石状。免疫荧光染色检测 2种培养方法培养的毛囊bulge干细胞CK19和CD34均呈阳性。DK-SFM和3T3滋养层培养的毛囊bulge干细胞克隆形成 率分别为69.4%和62.2% 。流式细胞仪检测DK-SFM培养的毛囊bulge干细胞中CD34 阳性率为72.3% ；3T3滋养层培养 的毛囊bulge干细胞中CD34阳性率为34.7％。结论 DK-SFM和3T3滋养层培养作为毛囊bulge干细胞的2种培养方法， 均可以获得未分化的毛囊bulge干细胞。用3T3滋养层培养毛囊bulge干细胞的方法比较复杂，且所获的细胞混杂有 3T3细胞，但用此种方法可获得大量的毛囊bulge干细胞。用DK-SFM培养毛囊bulge干细胞方法简单，但细胞不易贴 壁，且数量较少，但能有效分离出较纯的毛囊bulge干细胞，保持较好的细胞活性。 [关键词] 毛囊bulge干细胞；克隆形成率；细胞培养 [中图分类号] R 781.3 [文献标志码] A [doi] 10.3969/j.issn.1000-1182.2009.06.021 1 1 1 Comparative study of cultivation of hair follicle bulge stem cell DONG Gang , WANG Cheng-lin , PENG Li , YE Ling1，2. （1. State Key Laboratory of Oral Diseases, Sichuan University, Chengdu 610041, China; 2. Dept. of 610041, ） Endodontics, West China College of Stomatology, Sichuan University, Chengdu Chi