蛹虫草基质多糖急性毒性与`亚慢性毒性探讨.doc

蛹虫草基质多糖的急性毒性及亚慢性毒性研究 　　摘要：以急性毒性试验和亚慢性毒性试验研究蛹虫草基质多糖（Cordyceps militaris stroma polysaccharides，CMSP）的安全性，急性毒性试验采用ICR小鼠120只，随机分成6组，设空白对照组和不同剂量CMSP试验组（750、1 500、3 000、6 000、12 000 mg/kg）。亚慢性毒性试验采用SD大鼠80只，随机分成4组，设空白对照组和低、中、高3个剂量CMSP试验组（150、300、600 mg/kg）。结果表明，在14 d的观察中，急性毒性试验中各组小鼠未出现中毒症状和死亡情况，且灌胃剂量超过10 000 mg/kg。亚慢性毒性试验中，试验各组与空白对照组在体重增加、摄食量、血液指标、血液生化指标、尿常规、脏器指数及组织病理相比无明显差异，由此可知，CMSP实际为无毒物，且对大鼠未观察到有害作用水平为600 mg/（kgd） 关键词：蛹虫草基质多糖；急性毒性；亚慢性毒性 中图分类号：S567.3+9；R114 文献标识码：A 文章编号：0439-8114（2016）18-4776-07 DOI：10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2016.18.036 蛹虫草（Cordyceps militaris）又称北虫草，属于子囊菌门的真菌。在东南亚地区，蛹虫草常被作为中药或滋补品使用，这主要因其与传统名贵中药冬虫夏草有相似的活性成分和药理作用[1，2]。据报道，蛹虫草富含多种功能活性物质，如虫草多糖、虫草素、抗菌和抗肿瘤的腺苷衍生物、抗真菌素、L-色氨酸等[3，4]。蛹虫草多糖是蛹虫草的主要活性物质之一，纯化的蛹虫草多糖具有多种生物活性，如抗氧化、抗肿瘤、抗炎、降血脂、调节免疫、延缓衰老等作用[5-9]。目前，蛹虫草主要通过人工栽培进行大量生产[10]，有研究表明收获蛹虫草后的废基质中的多糖含量约为子实体的2～4倍，同样具有较好的抗氧化及保肝作用[11，12]。尽管蛹虫草作为一种重要的药食两用的真菌被人们长期广泛地使用，但有关蛹虫草基质多糖安全性的研究尚未见报道。因此，为研制开发保健食品或天然药物，有必要对蛹虫草基质多糖进行系统的安全性评价。本研究通过急性毒性试验及亚慢性毒性试验对蛹虫草基质多糖进行安全性评价，为蛹虫草基质多糖的进一步开发利用提供科学依据 1 材料与方法 1.1 材料与试剂 蛹虫草基质多糖（Cordyceps militaris stroma polysaccharides，CMSP）由南京晓庄学院食品科学学院食品工程研究室提供 ICR小鼠，动物合格证号：SCXK（苏）2012-0004，质量18～25 g，扬州大学比较医学中心提供。SD大鼠，动物合格证号：SCXK（苏）2014-0001，质量50～70 g，南京市江宁区青龙山动物繁殖场提供 1.2 仪器与设备 RE-3000型旋转蒸发器、SHZ-Ⅲ型循环水真空泵（上海亚荣生化仪器厂）；台式冷冻干燥机（美国LABCONCO公司）；高速冷冻离心机（美国热电公司）；NIKON 50i型生物显微镜（日本尼康公司）；全自动血液分析仪（法国COMPACT公司）；AU5800型全自动生化分析仪（美国Beckman Coulter公司） 1.3 方法 1.3.1 蛹虫草基质多糖的制备 准确称取5.0 g蛹虫草基质粉末于烧杯中，加入200 mL水，混匀，再加入2 000 U/mg的纤维素酶2.5 mL，调节pH到4.8，然后50 ℃水浴1.5 h，再转移至80 ℃水浴2 h，然后再进行超声波（超声40 Hz，100%输出功率，温度30 ℃）处理40 min，4 200 r/min离心10 min，收集上清液。将沉淀按上述步骤提取2次，将收集到的上清液旋转蒸发到一定体积，采用Sevag法除蛋白质，除去蛋白质后的溶液用95%的乙醇在4 ℃冰箱中醇沉过夜，经抽滤，浓缩，经DE-52柱层析及Sephadex G-100凝胶柱层析，收集多糖液，经浓缩，冷冻干燥得蛹虫草基质多糖 1.3.2 经口的小鼠急性毒性试验 取ICR小鼠120只，雌雄各半，体重18～25 g，在室温22 ℃±3 ℃、湿度30%～70%、自由摄食、饮水的饲养条件下，适应性饲养5 d 后，随机分成6组，每组20只，其中第Ⅰ～Ⅴ组为试验组，第Ⅵ组为空白对照组，正式给药前禁食8 h，不禁水。采用改良寇氏法[13]，根据预试验的剂量，Ⅰ～Ⅴ组分别以750、1 500、3 000、6 000、12 000 mg/kg，5个不同剂量组进行灌胃染毒，分3次灌胃染毒溶解于蒸馏水中的蛹虫草基质多糖，每次间隔8 h。空白对照组同样分3次灌服相同体积的蒸馏水。染毒