Pkm2_shRNA真核表达载体_省略_粒细胞白血病耐药细胞株作用研究_孙明莉.pdf

中国实验血液学杂志　JouralofExpermietalHematology2010;18 (1):85-89 ·85 · 　　(ArticleID):1009-2137(2010 )0 1-00 85-05　 · · Pkm2 -shRNA 1 2 2 2 孙明莉, 王冠军,李江, 崔久嵬, 张爱丽, 王中南 , 李晓萌, 李薇 1 吉林大学第一医院肿瘤中心, 吉林长春 130021; 吉林大学口腔医院口腔修复科, 2 吉林长春 130041; 东北师范大学生命科学学院, 吉林长春 130024 　　本研究旨在构建 M2 型丙酮酸激 (M2-pyruvatekiase;PKM2 )的小发夹结构 RNA(shRNA)的真核表 达载体, 研究特异性沉默 pkm2 基因对急性早幼粒细胞白血病(APL)耐药性的影响。设计 pkm2 基因的 3 个特异 shRNA序列, 利用基因重组技术将其克隆到含有 U6 启动子的 PBSU6载体上, 通过 切和测序等方法鉴定重组质 粒的正确性。利用 Westerblot方法检测了 pkm2-shRNA对急性早幼粒细胞白血病耐药细胞株 NB4 R2 细胞内源性 M2-PK蛋白表达的影响, 通过 NBT还原实验检测了 pkm2 基因沉默后 NB4R2 细胞分化情况。结果表明:成功构建 了 3 个有效特异的 pkm2-shRNA, 在蛋白水平上证明了其对 NB4 R2 细胞 M2-PK基因沉默的有效性。 发现干涉M2- PK基因后, 可显著地促进耐药细胞 NB4 R2 细胞的分化。 结论:DNA载体途径的 pkm2-shRNA能促进早幼粒细胞 白血病细胞的分化, 具有基因靶向药物开发前景。 　　 M2 型丙酮酸激 ;小发夹结构 RNA;NB4 R2 细胞;急性早幼粒细胞白血病 　　Q789;R733.7 1 　　A Costructio ofshRNAEukaryoticExpressio Vectorsofpkm2 GeeadTheirEffectoDrugResistatCellLieofAcute PromyelocyticLeukemia 1 2 2 SUNMig-L,iWANGGua-Ju, LIJiag, CUIJiu-We,iZHANGAi-Li, WANGZhog-Na, 2 LIXiao-Meg, LIWei 1 CacerCete,rTheFirstHospita,lJiliU iversit,yChagchu13002 1, JiliProvic,eChia; DepartmetofOraladMaxillofacial 2 Surgery, StomatologicHospita,lJiliU iversit,yChagchu 13004 1, JiliProvic,eChia; SchoolofLifeSciece,sNortheast NormalU iversity, Chagchu130024, JiliProvice, Chia