siRNA技术和其在乳腺癌治疗中的应用.pdf

第31卷第5期 遵义医学院学报 V01．31No．5 2008年10月 ACTAACADEMIAEMEDICINAEZUNYI Oct．2008 siRNA技术及其在乳腺癌治疗中的应用 岳昌武1，刘坤祥1，程晓明2，凌锌l，莫宁萍t (1．遵义医学院中心实验室，贵州遵义，563003；2遵义医学院第一附属医院乳腺与甲状腺外科，贵州遵义，563003) 【关键词】乳腺癌；RNA干扰；8iRNA；基因治疗 【中图分类号】11．737．9【文献标识码】A【文章编司1000—2715(2008)05—0532—05 乳腺癌是一种环境因素与遗传因素相互作用所 核酶复合物形成RNA诱导沉默复合物(RNA— 致的一类疾病，其发生发展是一个多因素、多阶段的 inducedsilencing 复杂过程，在基因水平它涉及众多基因的相互作用。 正常细胞中的癌基因和原癌基因等的动态平衡维持 通过碱基配对定位到同源mRNA转录本上，并在距 着机体内细胞的适当数量和功能，细胞在各种致瘤 离siRNA3’端12个碱基的位置切割mRNA。切割的 因素的作用下，基因突变引起原癌基因功能过强，抗 确切机制尚不明了，每个RISC都包含一个siRNA和 癌基因功能丧失，细胞生长因子及其受体、细胞内的 信号传导、细胞周期调控等发生异常，细胞正常凋亡 去了5 被抑变成不可控制的生长便可引起肿瘤。乳腺癌的 细胞区分真正的siRNA和其他双链的RNA的结构 发生是多个基因改变的结果，肿瘤组织(细胞)一般 基础。siRNA与所作用的靶mRNA的序列具有同源 高表达癌基因，是RNA干扰技术最佳的适应疾病之 性，其反义链和正义链对介导RNAi作用均是必需的， 一【1】。近年来，随着RNA干扰技术的不断完善，针它只有在相关作用因子如内切酶、解旋酶等存在下 对乳腺癌的各种癌基因的RNA干扰已经取得了肯 才能诱导RNAi效应。RNAi作用具有高效性，使外 定的效果并有望实现突破性进展。因RNAi具有高源基因在转录后水平上失活的同时诱导内源基因沉 度序列专一性，可快速、特异地识别靶基因mRNA默，使靶基因表达降到很低甚至完全剔除。RNAi还 序列，下调靶基因表达，并顺次造成相关基因的表型 具有高特异性，靶基因一个碱基突变也会导致干扰失 变化，获得目的基因功能丧失或表达量降低的效果。 败。在线虫中观察到RNAi效应通过生殖系统传递 故通过RNAi技术，有望特异性、长期及完全抑制目到后代，RNAi可能具有遗传性131。 的基因表达、逆转肿瘤细胞恶性表型、诱导肿瘤细胞 发生凋亡和降低肿瘤耐药性，从而达到治疗肿瘤之 2 RNA干扰的一般技术路线问 目的[210 常规的RNA干扰一般包括目的基因选择。 1 RNA干扰的分子基础 等几方面的内容。 2．1 siRNAs的设计 RNA干扰包括起始阶段和效应阶段(initiation 目前体外合成的siRNA及载 andeffector 体表达的shRNA大都按以下原则设计：①选择 steps)。在起始阶段，加入的双链RNA strain (doubleRNA，dsRNA)被切割为19—23核苷酸长 度的小分子片段RNA(smallRNAs， interfering siRNAs)。Dicer酶是RNaseⅢ家族中特异识别双链 编码JR(untranslat—ed RNA的一员，它能以一种ATP依赖的方式逐步切割有丰富的调控蛋白结合区域，UTR结合蛋白或翻译 由外源导人、由转基因或病毒感染等各种方式引入 起始复合物．可能会影响siRNA核酸内切酶复合物 结合mRNA从而影响干扰效果。②将潜在序列和基 的ds