基因工程实验理论.doc

1.TAE与TBE的区别 基因工程实验（完整版） 来源： 隋源的日志 选择判断填空： 1、基于构造的分离质粒DNA的制备方法：①碱变性法②溴乙锭-氯化铯密度梯度离心③质粒扩增。 2、E.coil质粒DNA提取时用的溶液Ⅲ的组成①5mol/L乙酸钾（60mL）②冰乙酸（11.5mL）③水（28.5mL）其中乙酸钾的作用是：恢复PH至中性，使DNA复性。 3、TE缓冲液的作用是：回溶DNA并长期保存。TE缓冲液成分：①10mmol/L Trish·HCl：10μL②1mmol/LEDTA：2μL③DD水：988μL 4、胰RNA酶的作用：提纯质粒，除去离心后上清液的RNA 5、苯酚：氯仿：异戊醇=25:24:1。其中苯酚和氯仿的作用是：是蛋白质变性，除去离心后上清液中多余的蛋白质和胰RNA酶。异戊醇的作用是：使溶液分三层，防止液相交界面的杂质，易于后期分离。 6、10×Loading Buffer （加样缓冲液）的成分：①蔗糖②溴酚蓝。10×Loading Buffer的作用：①前沿指示剂②增加比重，浓缩DNA，使点样后的DNA能够沉于电极缓冲液液面下。 7、10×HBuffer（酶缓冲液）的成分有：①Trish·HCl：PH7.4②NaCl③Mg2+ ④DTT（二硫苏糖醇）：其中二硫苏糖醇的作用是：还原剂，保持酶活性。 8、酶切反应的终止方式有：①70℃孵育10-15min②加入EDTA③加入苯酚 9、根据10×HBuffer（酶缓冲液）中NaCl的浓度可以将酶分为： ①低盐酶（0-50mmol/L）②中盐酶（50-100mmol/L）③高盐酶（100-150mmol/L） 10、酶的星号活性：在不是酶的最适条件下进行酶切，可能会导致酶的特异性降低，以至于一种酶可识别和切割更多的位点。以大肠杆菌EcoRⅠ为例：正常的识别是5’-GAATTC-3’星号活性下EcoRⅠ的识别位点是：5’-NAATTN-3’。 11、回文结构：是指从DNA双链来说，在各自的方向上的阅读结果都相同。限制性核酸内切酶识别4-8个核酸回文结构。 12、PCR反应变性、退火、延伸各段所持续的时间主要是由DNA的长度来决定的。引物的设计是PCR反应的关键步骤。 13、PCR反应引物是指位于待扩增的DNA两端互补的寡核苷酸序列。PCR反应模板是待扩增的DNA序列，可以是质粒DNA，基因组DNA，cDNA。 14、大肠杆菌质粒DNA提取时用的溶液Ⅲ加入时，要把液体充分混合并置于冰上孵育足够的时间，使沉淀完全，如果未充分将细菌裂解物与溶液Ⅱ混匀，将会影响质粒DNA的纯度。 15、DNA分子在琼脂糖凝胶中泳动时有电荷效应和分子筛效应。在一定的电场强度下，DNA分子的迁移速度取决于分子筛效应。DNA分子的迁移速度与相对分子量的对数值成反比关系。凝胶电泳可以分离：不同分子质量的DNA，相对分子质量相同但构型不同的DNA分子。 16、琼脂糖凝胶范围100bp-60Kb。EB是橘红色光、Gelview是绿色光。 17、大肠杆菌感受态细胞的制备始终要置于0℃下操作，从-80℃中取出来的大肠杆菌要置于冰盒中0℃降温，不要放置室温降温。 18、质粒DNA转化大肠杆菌的实验中有受体菌对照（阴性对照）和质粒对照（阳性对照）两个对照试验，其中受体菌对照实验是验证菌体本身是否为抗性突变株，加入2μL的无菌水。质粒对照实验是验证质粒本身是否能够在培养基上生长，加入200μLCaCl2。 19、纯水仪使用时注意防止爆炸，防止发水。天平分为托盘天平和电子天平。磁力搅拌器的使用要注意防腐蚀，注意保护电极。 20、PCR仪用于基因扩增，使用前要设置好程序，使用后注意关闭电源。紫外灯透视仪及凝胶成像系统是用于核酸条带的观察和照相。烘箱（300℃）用于烘干器皿。分子杂交炉用于southern northern 等分子杂交，使用时要注意正确设定杂交温度，时间等并且要防止同位素遗漏，污染。 21、超低温冰箱使用注意确保冰箱门关严，另外还要防止冻伤。恒温震荡培养箱是用于培养基中细菌的培养，使用时要调节好温度和转速。 22、高速冷冻离心机可以用于DNA和RNA等提取过程中的高速冷冻离心。制冰机使用时应注意①使用时先接通水源②使用后要关闭水源 23、蛋白质、核酸分析仪用于测定核酸及菌液的浓度等，使用时要注意①使用时先预热②使用前要调零③要调好光源 24、测序仪用于对核酸进行测序，使用时要注意①无菌操作，休息清洁②使用时检查是否漏气 25、转化体总数=菌落数×稀释倍数× 26、X-gal二甲基酰胺：使用时要避光保存。IPTG：安慰诱导物，使β-半乳糖苷酶和X-gal结合产生蓝色的菌落，水溶性，需要抽滤灭菌，高温分解，使用时要避光保存。 27、E.CoilDH5α，具有缺失前146个氨基酸的lacZ基因编