实验设计方案--马铃薯脱毒试管苗的快速繁殖和试管薯的诱导.doc

一.实验设计方案 实验序号 一 实验名称 马铃薯脱毒试管苗的快速繁殖和试管薯的诱导 实验时间 2012-4-10至2012-6-15 实验室 生科院324 1．实验目的 熟练准确配制MS培养基母液和组培室常用的化学试剂，巩固相关理论基础知识。 掌握无菌操作的基本技术；了解马铃薯脱毒种薯生产的过程，为脱毒种薯的生产提供必要的基础苗。 进一步熟悉配制培养基的步骤，能熟练准确配制培养基；掌握马铃薯试管薯形成的条件，设计适合的马铃薯试管薯诱导培养基。 通过本次实验，掌握马铃薯试管薯诱导的方法和技术。 2． 实验原理、实验流程或装置示意图 实验1-1 MS培养基母液和常用试剂的配制 培养基是植物离体培养组织和细胞赖以生存的营养基质。配制培养基时，为了减少试剂称取时的工作量和少量称取时出现的误差，以及避免多种营养成分混合导致沉淀产生或相互反应而失去培养效果，预先要将各种营养成分配制为一定倍数的培养基母液，待使用时稀释到要求的浓度。母液的浓度为培养基浓度的10倍、100倍或更高。 实验1-2 马铃薯试管苗快速繁殖培养基的配制 将事先配制好的培养基母液按一定比例稀释至浓度为培养基中规定的使用浓度，再加入琼脂、蔗糖、生长调节物质等，制备成符合要求的培养基。 实验1-3 马铃薯试管苗的快速繁殖 利用适宜的培养基，诱导带有腋芽的马铃薯单节茎段进行芽生长和根再生形成单苗，从而达 到快速繁殖的目的。 实验1-4 马铃薯试管薯诱导培养基的配制 将事先配制好的培养基母液按一定比例稀释至浓度为培养基中规定的使用浓度，再加入琼脂、蔗糖、生长调节物质等，制备成符合要求的培养基。 实验1-5 马铃薯试管薯的诱导 在培养马铃薯脱毒试管苗的培养容器中（试管苗培养4-6周），加入液体的马铃薯试管薯诱导培养基，置于全黑暗条件下即可诱导马铃薯试管苗结薯。 3．实验设备及材料 设备 冰箱、50ml三角瓶、500ml搪瓷杯、25ml量筒、1ml和5ml吸管、pH试纸（5.4~7.0）、封口膜、橡皮筋、扎口用棉线、药勺、称量纸、普通电子天平、移液管、量筒、烧杯、酒精棉球、小块纱布、已灭菌滤纸、枪状镊子、手术剪、解剖刀、已灭菌培养皿、酒精灯、高压蒸汽灭菌锅、电磁炉、超净工作台等。 药品及试剂 MS基本培养基母液、马铃薯快速繁殖培养基、蒸馏水、75％酒精、蔗糖、琼脂、NAA、6-BA、水解酪蛋白、1mol/LHCl、1mol/LNaOH、。 实验材料: 马铃薯脱毒苗 4．实验方法步骤及注意事项 方法步骤: 1-1 MS培养基母液和常用试剂的配制 在配制MS培养基母液时，为减少工作量可以把几种药品（如培养基中的大量元素或微量元素）配在同一母液中，但应注意各种化合物的组合以及加入的先后顺序，以免发生沉淀。MS培养基母液包括大量元素母液、微量元素母液、铁盐母液、有机物母液。 可按照以下步骤配制为：确定母液的浓度和体积→计算各种化合物用量→称量→分别溶解→混合→定容→装瓶→贴标签→放入冰箱保存 4.1大量元素母液的配制 MS培养基中的9种大量元素除C、H、O外可由KNO3、NH4NO3、CaCl2 ? 2H20、MgSO4 ? 7H2O、KH2PO4几种无机盐来供应，它们可配在同一母液中 母液 种类 成 分 规定用量 /mg? L-1 扩大 倍数 称取量/mg 母液定容 体积/ml 配1L MS培养基吸取量/ml 大量元素 KNO3 1900 20 38000 1000 50 NH4NO3 1650 33000 CaCl2 ? 2H20 440 8800 MgSO4 ? 7H2O 370 7400 KH2PO4 170 3400 4.2微量元素母液的配制 MS培养基中的微量元素可由MnSO4 ? 4H2O、ZnSO4 ? 7H2O、H3BO3、KI、Na2MoO4 ? 2H2O、CuSO4 ? 5H2O、CoCl2 ? 6H2O几种无机盐来供应，它们也可配在同一母液中（具体配制见下表）。 母液 种类 成 分 规定用量 /mg? L-1 扩大倍数 称取量/mg 母液定容 体积/ml 配1L 培养基吸取量/ml 微量元素 MnSO4 ? H2O 16.9 200 3380 1000 5 ZnSO4 ? 7H2O 8.6 1720 H3BO3 6.2 1240 KI 0.83 166 Na2MoO4 ? 2H2O 0.25 50 CuSO4 ? 5H2O 0.025 5 CoCl2 ? 6H2O 0.025 5 4.3分母液的配制 MS培养基中所需的维生素和氨基酸等有机成