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Ham试验 PNH不同时间尿样 4.蔗糖水溶血试验 【原理】 蔗糖离子浓度低,增强补体与红细胞结合,使红细胞膜上形成小孔,蔗糖进入红细胞而致溶血。 【临床意义】正常阴性。PNH本试验常为阳性。可作为PNH筛选试验,阴性可排除,阳性应作Ham 试验。 5.蛇毒溶血试验 【原理】 蛇毒因子是种溶血因子,能直接激活补体C3,激活补体系统,造成溶血。 【参考值】 溶血度5% 【临床意义】 阳性提示PNH。 6. CD55 CD59检测 【原理】CD55,CD59是补体调节蛋白,具有GPI锚定蛋白作用。PNH患者红细胞和粒细胞上GPI锚缺陷,无法结合在细胞膜上,导致对补体敏感,容易发生溶血。 【参考范围】 外周血中CD55,CD59阴性红细胞和中性粒细胞均5% 【临床意义】PNH患者该类细胞10% PNH诊断 1.初筛试验 血管内溶血的特点: 血浆游离血红蛋白增高,结合珠蛋白(Hp)降低,血红蛋白尿及尿中出现含铁血黄素等 2.诊断试验 酸化血清溶血试验(Ham’s试验)、蔗糖溶血试验、蛇毒因子溶血试验等 3.特异的诊断PNH的实验方法 CD55和CD59检测:用双色荧光流式细胞术检测PNH患者红细胞膜上的CD55和CD59,当PNH患者的CD59阴性细胞占3%以上时即可检出 (二)红细胞内酶缺陷的检验 1. 自身溶血试验及纠正试验 【原理】细胞内酶缺陷(葡萄糖-6-磷酸脱氢酶 G-6PD、丙酮酸激酶),葡萄糖酵解障碍,不能提供足量ATP,红细胞在自身血浆中温育48小时,不能继续从血浆摄取葡萄糖作能量来源,ATP减少,不能维持红细胞内钠泵作用,导致溶血增加。在温育过程中分别加入葡萄糖和ATP作纠正物,看溶血能否纠正。 【参考值】正常人轻微溶血,溶血度 3.5%;加葡萄糖、ATP溶血明显纠正, 溶血度1%。 【临床意义】 1) 葡萄糖-6-磷酸脱氢酶 (G-6PD)缺乏症、 蚕豆病溶血增加,加葡萄糖、ATP溶血部分纠正。 2)丙酮酸激酶缺乏症加葡萄糖不能纠正,加入ATP能纠正。 (三)异常血红蛋白的检测 血红蛋白电泳检测 【参考值】正常成人电泳图谱显示4条区带,最多的是HbA, 少量HbA2,再后为两条两更少的红细胞内的非血红蛋白成分(NH1、NH2)。 【临床意义】有异常血红蛋白区带见于海洋性贫血、异常血红蛋白病 (四)自身免疫性溶血的检验 1. 抗人球蛋白试验 ( Coombs’ test) 【原理】红细胞的膜电位使两个红细胞间保持一定距离。不完全抗体IgG分子较小,无法连接两个邻近的红细胞而只能和一个红细胞抗原相结合。用正常人血清免疫家兔,获得抗人球蛋白血清。抗人球蛋白是完全抗体,可与多个红细胞表面不完全抗体结合,使红细胞相互连接起来出现凝集现象,称为抗人球蛋白试验阳性。 直接抗人球蛋白试验:检测红细胞表面结合有不完全抗体。 间接抗人球蛋白试验 :检查血清中有无游离的不完全抗体。 抗人球蛋白 IgG不完全抗体 RBC 将病人血清和正常RBC混合,再加入抗IgG试剂 病人 血清 RBC 抗IgG 【参考值】正常人直接、间接均抗人球蛋白试验均阴性 【临床意义】 1)阳性见于AIHA, 新生儿溶血病,SLE等 2) AIHA大多为IgG (温抗体型 37℃条件下作用最强 ),少数为IgM (冷抗体型 4℃条件下进行试验) 3)间接试验主要见于Rh或ABO妊娠免疫性新生儿溶血病母体血清中不完全抗体检测。 (五)冷凝集试验 【原理】机体存在抗自身红细胞抗体,在低温时与相应抗原结合,使红细胞凝集,特别是在4℃时最强烈,但温度升高到37 ℃后凝集消失,称为冷凝集试验。 【参考值】效价1:40 【临床意义】某些AIHA,传染性单核细胞增多症、恶性淋巴瘤等可阳性。动态检测,凝集效价增高4倍以上较有诊断价值。 溶血性贫血的检测 1.是否为溶血性贫血 2.区分溶血部位 3.溶血原因诊断 学习重点 Coombs’ 试验、酸溶血试验、渗透脆性试验等的临床意义 思考题 哪些实验室检查主要提示血管内溶血? 溶血性贫血常用的实验室检查 昆医附二院血液科 周泽平 溶血性贫血定义 各种原因导致红细胞生存时间缩短、破坏增多或加速,骨髓代偿造血功能不足时所发生的一类贫血叫溶血性贫血。 指骨髓代偿能力足以补偿红细胞的损耗而不出现贫血时称溶血性疾患。 溶血性贫血的分类 按发病机制分类 1. RBC内在因素(遗传性/获得性) RBC膜缺陷:遗传球、PNH RBC酶缺陷:G-6PD缺乏症 珠蛋白异常(肽链不平衡):海洋性贫血、异常血红蛋白病 2. RBC外在因素(获得性) 免疫性溶贫: AIHA 、新生儿溶血症、药物诱发红细胞相关抗体 机械损伤性:DIC 、
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