细胞化学及组织化实验一~实验四.ppt

细胞化学与组织化学实验须知 1．自觉遵守课堂纪律,维持课堂秩序,不迟到、不 早退,保持整洁、安静、有序的实验环境。 2．认真预习实验课内容熟悉实验目的、原理和方 法，了解所需使用仪器。 3．实验台面保持整洁，书包等物品按规定放置整 齐，仪器、药品摆放整齐、有序，公用试剂用毕, 物归原处。地面及水池内不得乱丢废物。 4．使用药品、试剂和各种药品注意节约，爱护器 材。洗涤和使用仪器时应仔细，防止损坏仪器。严格遵守 仪操作规程，在未知正确操作程序时，不要独自使用，须在老师的指导下进行。 实　验　报　告　格　式 实验(编号)(实验名称) 1.实验目的和要求 2.实验内容 3.实验原理 4.实验操作方法(或步骤) 5.实验结果与分析 实验一　细胞内碱性蛋白的显示 - 组蛋白的显示 南昌大学生命科学学院 主讲: 范 丽 华 一 、实验目的 掌握细胞内碱性蛋白的鉴别方法并了解碱性 蛋白在细胞内的分布。 学会制作血涂片并掌握制作技巧。 二、实验原理 由于不同的蛋白质分子所带的碱性和酸性基团的数目 　不同，在pH值不同的溶液中，蛋白质分子所带的净电 　荷多少不同。如在生理条件下，整个蛋白质所带负电 　荷多，则为酸性蛋白质；带正电荷多，则为碱性蛋白 　质。据此，可将标本经三氯醋酸处理提出核酸后用不 　同pH值的固绿染液分别染色，细胞内的酸性蛋白和碱性蛋白质显示出来。 三、实验用品 1．材料 鲫鱼 2．试剂 1)carnoy固定液(无水乙醇：氯仿：冰醋酸按6：3：1配制) 　一次要配制1L. 2)0.1%碱性坚牢绿染液：取0.1 g坚牢绿加入100毫升蒸馏 　水，再加少量0.1M NaoH 调节pH至8.0-8.1. 3)5% 三氯醋酸 4)70%乙醇 5)香柏油 3．器材 解剖盘，注射器，载玻片，显微镜,水浴锅等。 四、实验方法 1．将鲫鱼放入盘中，尾静脉取血,滴一滴血在干净载玻片一端，推片，按此法制备二张血涂片，室温晾干。 2. 将涂片作好标记放在现配制的Carnoy固定液中固定10分钟，室温晾干。 3．放入现配制的5％三氯醋酸中90℃(10-15分钟)，抽提出核酸。 4. 将玻片放在70%乙醇中5-10分钟．清水冲洗多次（3分钟以上），以冲去痕迹的三氯醋酸。 5．滤纸吸干玻片上水分。 6. 一张片放入0.1％碱性固绿(pH8.0～8.1)中染色15～20分钟。 7．清水冲洗（3分钟），盖上盖片镜检。 对照片 不进入5％三氯醋酸中抽提出核酸。其他步骤同上。. 五、实验中注意事项 (1)用5%TCA提取DNA是该实验中的关键。 DNA必须被提取，以使染色质的负电荷下降，用热TCA提取核酸后，酸性染料（固绿）在碱性pH下，碱性蛋白可以选择性地被染色，如未被提取，不能染色，或整个切片染成蓝绿色，水洗或进入酒精即褪色。 (2)染液pH必须高（ pH8.0~8.1），从而使其他蛋白质染色极微。 六、血涂片的制作 １.取一滴鲫鱼新鲜的血液，置于玻片的一端，以左手拿该片的两端，迅速用右手拿住另一载玻片的一端，在左手载玻片上由前向后接触血滴，使两载玻片约成４５°角，轻轻移动，使血滴成一直线，然后由前向后推为一均匀的薄片。 ２.室温下自然晾干。待晾干后进入到Ｃａｒｎｏｙ固定液中进行固定。 注意：在制作血涂片的过程中要用力均匀，避免来回推拉及刮片．好的血涂片在显微镜下观察到的细胞应成单层均匀排列。 七、相关理论知识 １．家畜血涂片。低倍镜下观察可见大量圆形而细小的红细胞。白细胞很少，稀疏地散布于红细胞之间，选白细胞较多的部位（一般在血膜边缘和血膜尾部，因体积大的细胞常在此出现） 。 红细胞:呈圆盘状,边缘厚,中间薄,无核。 中性粒细胞:是白细胞中较多的一种,体积比红细胞大,核呈杆状(为幼稚型,胞核细长,弯曲盘绕成马蹄形,S形,W形或U形等多种形态)或分叶状,一般分3~5叶或更多，跟该细胞年龄有关。 淋巴细胞：有大中小三种类型，其中小淋巴细胞最多，血膜上很易看到，体积与红细胞相近．具核，核大而圆．大淋巴细胞在正常细胞中不常见到，体积与单核细胞相近或略小，胞核圆形，胞质较小淋巴细胞多。 八、实验结果 经碱性固绿染色片中，胞质、核仁不着色,细胞核大部分被染成绿色，是为碱性蛋白质存在处。经酸性固绿染色片中，因胞质和核仁中有酸性蛋白，被染成绿色。 九、思考题 1.细胞内碱性蛋白显示的基本原理? 2.制作一张好的血涂片应掌握什么技巧? 3.家禽,家畜及鱼类的血细胞有何区别? 十、 实验报告要求 1.