蛋白质双向凝胶电泳操作经验和解析.pdf

双向电泳操作经验及解析 目录 1 蛋白质组研究概述 2 双向电泳样品制备 3 双向电泳操作解析 4 荧光差异双向电泳 5 染色及差异分析 目录 1 蛋白质组研究概述 2 双向电泳样品制备 3 双向电泳操作解析 4 荧光差异双向电泳 5 染色及差异分析 蛋白质组学研究必要性 生物调控机制的复杂性：涉及多个基因的多个层次的系统调节 蛋白质：基因功能的执行者，调控更为直接 蛋白质组学：从全局和整体的角度发现去解决问题，分析更为全面 蛋白质组学与代谢组学等其它策略相结合：发展的新趋势 From DNA to Protein From Protein to Metabolite 蛋白质组学研究现状 数据库：NCBI-PUBMED 时间：2011年9月5 日 条件：标题检索 词汇：物种名+proteome 蛋白质组学主要研究方向 表达蛋白质组学： 人类肝脏蛋白质组计划 人类血浆蛋白质组计划 比较蛋白质组学： 动物疾病的发病机制 植物抗逆的分子机理 生物标志物发掘 蛋白质互作组学 蛋白质翻译后修饰 蛋白质组学研究常用技术 双向凝胶电泳(2-DE) 一级质谱(MS-PMF) 凝胶 荧光差异双向电泳(DIGE) 串联质谱(MS/MS) 二维色谱(2D-HPLC) 非凝胶 部分序列比对(Sequence Query) 毛细管电泳(HPCE) 分离 鉴定 计算机辅助（PDquest、Mascot ） 蛋白质双向凝胶电泳 优点：蛋白质组研究的经典技术、分辨率高、可视性好 缺点：重复性不高、对于极端等电点和极端分子量蛋白分离效果不好 蛋白质双向凝胶电泳 部分仪器设备 等电聚焦仪 SDS电泳仪 凝胶扫描仪 蛋白质双向凝胶电泳 常规双向电泳 pH4 7 1 2 % S D S - P A G E CBB Stain