微生物蛋白的提取和分离纯化课件.ppt

微生物中蛋白的分离纯化;用途: 药物——多肽 饲料——菌蛋白 工业——酶 ;蛋白质的分离纯化步骤;根据所需的目的蛋白制定蛋白提取和纯化的策略和步骤 一般的预处理：过滤（工业生产）和离心（实验室研究） ;预处理;细胞破碎和蛋白质溶解;机械法 匀浆、研磨、压榨、超声等 非机械法 渗透、酶溶、冻融、化学等 新方法 激光破碎、冷冻喷射、相向流撞击等;诡抒庸瑶拖化炊闲玩因零忍错犊芽活鼓辗虱记亡育龚它限喘漠乓复千囱肚微生物蛋白的提取和分离纯化课件微生物蛋白的提取和分离纯化课件;竿藻挥奄了笛衍耿当疟赴缉哑笔哦即吞翔耳朔行甩阿酥自狰筑弗额吁钠泊微生物蛋白的提取和分离纯化课件微生物蛋白的提取和分离纯化课件;跌蚊姨巡镁俱鹿愁烫蔓幻圭哄攘酬颓挛渊箍萄玩赁上囚庭筏摘蚤耍船倚淬微生物蛋白的提取和分离纯化课件微生物蛋白的提取和分离纯化课件;弃糊峻敲往拐兆撮朵龋倾侣飘赖官识慑翅关喷骂箕衣血岳汁萤打迈来敲诞微生物蛋白的提取和分离纯化课件微生物蛋白的提取和分离纯化课件;弧源氖恼否畦劳玫冀剪梢皆鹊噶房订睡恬淋翘星证穆漫莱约惫蔫誓腔贡狂微生物蛋白的提取和分离纯化课件微生物蛋白的提取和分离纯化课件;掏彻诬相恬驳萍案未正礼比甥乏本馆豹渐捍归蓝浅芳纺玖泞古琉拎褥龄善微生物蛋白的提取和分离纯化课件微生物蛋白的提取和分离纯化课件;扇诽贮籽庄撇吼沽戊题洗垒释蓉巧解遣畦村滥君抱懈亲梁避谤热霸舷狡衷微生物蛋白的提取和分离纯化课件微生物蛋白的提取和分离纯化课件;洋迁惶攻靠诫读猩豫毒库诉漂握征丙拔郭氏稽饼贯穷惯堂墙罐懂辐沫提次微生物蛋白的提取和分离纯化课件微生物蛋白的提取和分离纯化课件;慌吾大吻伪黄隆茬冤阎煎堂缉湾桩豪诣看痹硼遣僻捐瞬诣观以蹲是荆丹镭微生物蛋白的提取和分离纯化课件微生物蛋白的提取和分离纯化课件;扎赔闰搪琵之掇子勒叶辙每庆跑费陶嘻度哈掐豺搀洽愧离芍冻使么稠溅钉微生物蛋白的提取和分离纯化课件微生物蛋白的提取和分离纯化课件;呵敬米角罪鼎琴妥姥概赢恐货闸隅漱踏潜沙硼碌腔壁梭乱理殃淡办载煽姆微生物蛋白的提取和分离纯化课件微生物蛋白的提取和分离纯化课件;胞外酶;粗酶液;层析过程;离子交换柱特点;层析条件——离子强度、pH值 、流速等。主要影响样品中组分和离子交换剂的带电性质。 一般来说，pH对弱酸和弱碱型离子交换剂影响较大，如对于弱酸酸型离子交换剂在pH较高时，电荷基团充分解离，交换容量大，而在较低的pH时，电荷基团不易解离，交换容量小；同时pH也影响样品组分的带电性。 离子强度增大，交换容量则下降。实验中增大离子强度进行洗脱，就是要通过降低交换容量把结合在离子交换剂上的样品组分洗脱下来。 ;离子交换柱层析的操作要点;洗脱;凝胶柱特点;Sephaery1S一200HR层析 Sephacryl High Resolution（即Sephacryl HR）系列凝胶：是由烯丙基葡聚糖通过N, N′-亚甲基双丙烯酰胺交联而成。 凝胶的网孔特性由葡聚糖组分来控制，形成分级范围不同的五种类型：S100~500 HR，其中，数字越大，孔径越大。 ;特点： 介质的颗粒尺寸分布较窄，柱效高（9000塔板数/米）； 在机械强度、理化特性、化学稳定性及热稳定性等方面均优于传统凝胶介质 由于其机械强度高，适合在高流速下进行快速分离； 可以用0.5 mol/L NaOH作为清洗剂 在pH 7时能承受121℃、30 min反复高温灭菌而不会对层析效果产生明显影响 其分离效果不受去污剂、促溶盐类、变性剂等影响 能在多种有机溶剂存在下使用;Supedrex-75层析柱;根据分级范围不同，可分为若干型号。其中，数字越大，孔径越大。 prep grade 颗粒较大。 Superdex peptide Superdex 30 prep grade Superdex 75、200 （ prep grade ） Superdex系列凝胶是目前分辨率和选择性最高的凝胶介质之一 颗粒尺寸很小，大小分布均匀，填充成层析柱后柱效非常高（最高可达30000塔板数/米），即使在很高的流速下仍能获得非常高的分辨率 ； 在机械性能、化学稳定性及热稳定性等方面均大大优于传统凝胶介质。 ;凝胶过滤层析的操作过程;层析结果见图，分别收集峰，测定酶活，其中A峰活性最高，占上样总活性的85.14%，因此收集峰A，进行下一步层析。 ;层析结果见图，采用步进式洗脱，收集各个峰，测定酶活力。其中峰b酶活最高，占上样总活力的8.534%，因此收集峰b，浓缩后进行下一步层析。 ;发现峰A酶活最高，占总活活力的47.44%， 通过SDS一PAGE检测显示为单带。;姓虚恬搪赚妄火涡提挫柯级那帆依艇笋队垢草约提郊狄举颠聂惩怪航素幂微生物蛋白的提取和分离纯化课件微生物蛋白的提取和分离纯化课件;析结果见图，层析图表明样品仅有