细胞实验基本操作与实验室要求课件.ppt

第三章 细胞工程实验室及实验基本操作; 第一节 实验室及仪器设备 第二节 实验基本操作 第三节 培养基及其配制;第一节 实验室及仪器设备;1、植物实 验 室;2、动物细胞培养室 原则是防止微生物污染和有害因素影响，要求工作环境清洁、空气清新，干燥和无尘。 实验室设置上至少有4个房间：基本操作室，洗涤，灭菌。缓冲间，位于准备室和培养室之间。无菌培养室，内有超净工作台，一般应在内侧，室内可消毒，培养箱。 鉴定分析室，用于细胞的观察和分析研究。;二、实验室仪器设备;;;;3．药品存贮和配制仪器设备 4．观察分析仪器设备 显微镜（高倍、倒置、实体解剖和荧光显微镜等）及配套照相系统、解剖镜、离心机、液氮容器、恒温箱、精密天平等。 5．其它仪器设备，如流式细胞仪，酶标仪等。;;;二氧化碳细胞培养箱;;;; MB-IV 型 酶 标 ??? 测 仪 ;;;;第二节 实验室的基本操作;一、清洗 未用过的玻璃器皿：常有游离碱性物质，使用前，先用1%稀盐酸浸泡一夜，然后用洗衣粉洗涤，清水冲洗，蒸馏水冲洗一遍，晾干备用。 已用过的玻璃器皿：用洗衣粉刷洗，清水冲洗，晾干备用。 新的塑料器皿：打开即用。 已用过的塑料器皿 金属器皿：一般不宜用洗涤液洗涤，新的用热洗衣粉水洗净、冲洗后，蒸馏水冲洗擦干即可。;细胞培养的玻璃器皿常需用洗液浸泡，再拿出冲洗，洗液配方如下：;1、KCrO4液要冷却后才能加浓硫酸。以防暴沸。 2、浓硫酸要慢慢倒入KCrO4液中。 3、洗液要密封保存，以免失效。正常洗液黑棕色? 蓝绿色（效用变弱）;二、消毒灭菌;高温高压灭菌可能出现的问题： pH值下降0.3-0.5 太高温度灭菌时可能使糖焦化，可能产生毒性，对有些培养基应选择合适条件灭菌。 灭菌时间过长使盐沉淀，同时使琼脂解聚 挥发性物质不能高温灭菌，否则会被破坏;;;消毒剂;三、无 菌 操 作;席肤备屡痛救抵长疽圆绕剐毡湍挛夹捍文桐碗却鹿磋嘘贫碴洽才葬震末辗细胞实验基本操作与实验室要求课件细胞实验基本操作与实验室要求课件;;2、无菌操作步骤 将培养材料灭菌后放入已消毒的培养皿中，置于超净工作台酒精灯火焰下方，进行适当切割或其他处理。 在酒精灯火焰处将培养瓶盖轻轻打开，瓶口在火焰处旋转灼烧。 将镊子过火，用镊子将培养材料置于培养基上 将镊子、瓶口及塞子过火后盖回瓶口。 ※ 继代培养用灭菌的器具（镊子或吸管） 直接将培养材料放置在新培养基上。;第三节 培养基及其配制;定义：培养基是离体培养组织或细胞赖以生存的营养基质，是为离体培养材料提供的近似生物体内生存的营养环境。;必要元素在细胞内的主要生理作用;一、植物细胞培养基及其配制;堑蚂讫她骑自微坤阿淹格尖腥元醒弛拉蛊擦琶娄画没条惯鬃准湾澡篆匙顶细胞实验基本操作与实验室要求课件细胞实验基本操作与实验室要求课件;（一） 培养基成分 1、无机元素 氮--各种氨基酸、维生素、蛋白质和核酸的重要组成成分。 钙--细胞壁的成分之一 铁、锌、钼--某些酶的组成成分 植物缺乏无机元素可能引起的疾病：植物失绿、细胞分裂停止、细胞分化受阻等。 营养元素过多可以引起植物细胞代谢障碍、生长抑制。;2、有机营养成分;氨基酸类;维生素类;糖类;肌 醇; 天然有机添加物类;生长调节物质;植物生长调节物质包括：  生长素（auxin）类 细胞分裂素类（cytokinin） 赤霉素（gibberellin）类 脱落酸（abscisic acid） 乙烯（ethylene）等 ;生长素类;荡何员砰武坏佐盲轰浦糠镶轴谍绎讥昼菊膛鹊烩横鸿万浮弃乾况雷牡闭赠细胞实验基本操作与实验室要求课件细胞实验基本操作与实验室要求课件;常用生长素有： 2,4-二氯苯氧乙酸：有抑制芽形成的副作用，一般用于启动细胞的脱分化。 诱导分化则用NAA或IBA、IAA。 萘乙酸（NAA） 吲哚丁酸（IBA）：人工合成，120oC仍很 稳定。组织培养中常用。生根效果好。 吲哚乙酸（IAA）等：天然植物生长素，见光易分解，高温高压易破坏。 ;细胞分裂素类;邹彰存映净月蔬县誊拖谱槐悄俗锦摩柞嫉蛋幂呵砌浅兵琅诱铱浩块武簿姨细胞实验基本操作与实验室要求课件细胞实验基本操作与实验室要求课件;常用的细胞分裂素有：激动素或糖基腺嘌呤（kinetin，KT）（见光易分解，需暗处保存） 6-苄基腺嘌呤（6-BA） 2-异戊烯腺嘌呤（2-Zip） 玉米素（zeatin，ZT）等 ;赤霉素类;脱落酸;短日照条件诱导脱落酸合成，延缓生长、促进落叶、形成休眠芽（秋季）。 长日照条件诱导赤霉素合成，促进生长、诱导开花（春夏季）。;乙