动物的克隆.pptVIP

1、动物细胞培养 动物组织在体外及人工条件下维持生活状态或生长特性。 细胞系— 细胞系泛指可传代的细胞 细胞株是具有特殊性质的细胞系 植物组织培养和动物组织培养的比较 单细胞不如群体细胞 原代培养细胞和有限细胞系不如无限细胞系、转化细胞系和肿瘤细胞 1.动物细胞全能性的表现程度 2.动物难以克隆的原因 * * （一）动物细胞、组织培养 动物组织 分散成单个细胞 培养 细胞得以生存并保持生命活动现象 生长、分裂乃至接触抑制和有规律的衰老、死亡性能等 机械消化或胰酶消化 （1）定义 2、动物组织培养 3.动物组织培养与动物细胞培养的关系 单个细胞 转入特殊培养液中进行原代培养 细胞形成生长晕并增大 分装到多个卡氏瓶中进行传代培养 有关概念: （2）连续细胞系: （1）有限细胞系： 连续细胞株 有限细胞株 细胞株- 可连续传代的细胞 不能连续培养下去的细胞系 能连续培养下去的细胞系 发生了转化：大多数具有异倍体核型，有的是恶性细胞系，具有异体致瘤性，有的获得不死性（保留接触抑制，不致癌） 例：二倍体细胞 通过一定的选择或纯化方法，从原代培养或细胞系中获得的具有特殊性质的细胞 具有恒定的染色体组型、同工酶类型、病毒敏感性和生化特性。 细胞系与细胞株的关系 （3）动物组织培养的条件: 1.无菌无毒的环境 2.营养 3.温度和pH 4.气体环境 培养结果 培养基特有成分 培养基性质 原理 动物细胞培养 植物组织培养 比较项目 细胞的全能性 细胞增殖 固体培养基 液体培养基 蔗糖 植物激素 葡萄糖 动物血清 植物体 细胞株、细胞系 （三）克隆培养法 把一个单细胞从群体中分离出来单独培养，使之繁衍成一个新的细胞群体的技术 1、定义： 未经克隆的异质性细胞系 纯系： 分离 克隆 经克隆以后的细胞的后裔细胞群，来源于一个共同的祖细胞。 2、产物: 遗传性状均一、表现的性状相似的纯系 3、细胞克隆的基本要求: 必须保证所建成的克隆来源于单个细胞 4、克隆对象的选择 依据： 选择对培养环境具有较大适应范围和具有较强独立生存能力的细胞。 5、提高细胞克隆形成率的措施 选择适宜的培养基、添加血清、以滋养细胞支持生长、激素刺激、使用CO2培养箱调节PH 6、细胞克隆的用途 从普通细胞系中分离出缺乏特殊基因的突变细胞系，方便科学研究 全能干细胞 多能干细胞 专能干细胞： 低等动物细胞的全能性一般比较容易体现。 无论分化或癌变，变化的都是表现型，基因组完整性可以保留 细胞的分化使得细胞发生了基因的差异表达，有的基因开放，有的基因关闭 已分化的体细胞，基因组中基因的活动很不完全，不能像受精卵那样发挥细胞的全能性 3.动物核移植实验和克隆繁殖 利用一个细胞的细胞核（核供体）来取代另一细胞中的细胞核，形成重建的“合子”。 核移植： 实践证明：胚胎细胞核的移植成功率远高于成体细胞。 克隆羊培育过程 黑面绵羊去核卵细胞 白面绵羊乳腺细胞核 细胞核移植 重组细胞 电脉冲刺激 8细胞胚胎 胚胎移植 另一头绵羊的子宫 妊娠、出生 克隆羊多利 体细胞核移植技术实例 讨论（阅读P36-37） 体细胞羊的克隆成功证明了什么？ 为什么克隆羊能获得成功，请用分子细胞学机理来阐述原因。 克隆动植物具有哪些应用？ 为什么进行动物细胞培养？获取细胞或细胞分泌蛋白 广义的组培还包括器官培养 为什么要进行传代培养？如果不进行分离培养，到一定时期培养的细胞会因细胞密度过大和代谢消耗引起营养枯竭，不能正常生长。 原代培养物首次传代时就可以成为细胞系 *