实验六-综合实验(四)细菌生理生化试验.ppt

实验六-综合实验（10个同学为一组） （四）细菌生理生化试验 培养基配制 《微生物学实验》P243 固体淀粉培养基、蛋白胨水培养基、糖发酵培养基、葡萄糖蛋白胨水培养基 试剂和溶液配制 《微生物学实验》P251 卢戈氏碘液、乙醚、吲哚试剂、甲基红试剂、 40% KOH、 5% α-萘酚溶液 （一）淀粉水解实验 目的 掌握进行微生物大分子物质水解试验的原理和方法 （一）淀粉水解实验 实验材料与用具 大肠杆菌、未知菌 固体淀粉培养基、卢戈氏碘液 接种环等 （一）淀粉水解实验 内容与步骤 1、每组2个固体淀粉培养基平板 2、1个平板分成四等分，穿刺接种2个未知菌，同时穿刺接种大肠杆菌作为阳性对照，还有阴性对照（注意在平板的反面相应地方写上菌名或编号） 3、将平板倒置在培养箱中37°C培养24小时 4、观察菌生长情况，打开盖子，滴入卢戈氏碘液，轻轻旋转平板，使碘液均匀铺满整个平板 5、如菌苔周围出现无色透明圈，说明淀粉被水解，为阳性。透明圈大小可初步该菌水解淀粉的能力 实验结果 （一）淀粉水解实验 菌名 淀粉水解试验 大肠杆菌 未知菌 （二）糖发酵试验 目的 了解糖发酵的原理和在细菌鉴定中的作用 掌握通过糖发酵鉴别不同微生物的方法 （二）糖发酵试验 实验材料与用具 大肠杆菌、未知菌 葡萄糖发酵培养基和蔗糖发酵培养基（是液体试管装培养基，内装有倒置的德汉氏小管） 试管架、接种环等 （二）糖发酵试验 内容与步骤 1、每个组葡萄糖发酵培养基和蔗糖发酵培养基（是液体试管装培养基，内装有倒置的德汉氏小管）各3只，1只为阳性对照，另2只做平行试验 2、在试管外壁标明培养基名称和接种的菌名 3、6只试管均放置培养箱37°C培养48小时 4、观察各试管颜色变化及德汉氏小管中有无气泡 5、变黄说明产酸，小管内有气泡说明产气 （二）糖发酵试验 实验结果 糖发酵 大肠杆菌 未知菌 葡萄糖发酵 蔗糖发酵 （三） IMViC实验 目的 了解IMViC实验的原理及其在细菌鉴定中的意义和方法 （三） IMViC实验 材料与用具 大肠杆菌、未知菌 吲哚试验-用蛋白胨水培养基（液体试管装培养基） 甲基红试验-用葡萄糖蛋白胨水培养基（液体试管装培养基） 伏-普（V-P）试验-也用葡萄糖蛋白胨水培养基（液体试管装培养基） 接种环等 1、吲哚试验 1、每组3支蛋白胨水培养基（液体试管装培养基），1支接种大肠杆菌做阳性对照，另2支接种未知菌 2、37°C培养48小时 3、取出，向培养基内加3-4滴乙醚，摇动数次，静置1分钟，待乙醚上升后，沿管壁徐徐加入2滴吲哚试剂（对二甲基氨基苯甲醛），观察 4、在乙醚和培养物之间产生红色环状物为阳性 2、甲基红实验 1、每组3支葡萄糖蛋白胨水培养基（液体试管装培养基），1支接种大肠杆菌做阳性对照，另2支接种未知菌 2、37°C培养48小时 3、取出，向培养基内加入2滴甲基红试剂，培养基变为红色者为阳性，变为黄色者为阴性 3、V-P试验 1、每组3支葡萄糖蛋白胨水培养基（液体试管装培养基），1支接种大肠杆菌做阳性对照，另2支接种未知菌 2、37°C培养48小时 3、取出，向培养物内加5-10滴40% KOH,然后加入等量（ 即5-10滴）的5% α-萘酚溶液，用力振荡，再放入37°C保温15-30分钟，以加快反应速度，若培养物呈红色，为阳性。 （三） IMViC实验 实验结果 菌名 吲哚试验 甲基红试验 V-P试验 大肠杆菌 未知菌 环境微生物（细菌）分离鉴定过程 取样 稀释 涂布接种 计数、菌落特征观察及挑取优势菌 一般形态鉴定（革兰氏染色、芽孢染色） 生理生化鉴定（淀粉水解试验、糖发酵试验、IMVIC试验） 细菌稀释示意图 人员安排 1、每个班分成6个组，每组12人左右 2、每个组配一种培养基 第1组3个同学配牛肉膏蛋白胨培养基800ml，倒36个平板（每组6个） 第2组3个同学配固体淀粉培养基300ml ，倒12个平板（每组2个） 第3组3个同学配葡萄糖发酵培养基200ml，装18支试管（每组3支） 第4组3个同学配蔗糖发酵培养基200ml，装18支试管（每组3支） 第5组3个同学配蛋白胨水培养基200ml，装18支试管（每组3支） 第6组3个同学配葡萄糖蛋白胨水培养基400ml，装36支试管（每组6支） 人员安排 3、每组配一种试剂 第1组2个同学配甲基红试剂 第2组2个同学配配卢戈氏碘液 第3组2个同学配1.6%溴甲酚紫乙醇溶液 第4组2个同学配40%氢氧化钾 第5组2个同学配吲哚试剂，准备乙醚 第6组2个同学配5% α-萘酚溶液 人员安排 4、实验过程 1）每组