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CMI: Chronic myocardial infarction group心绞痛手术组 NMDAR: N-methyl-D-aspartic acid receptor N-甲基-D-天冬氨酸受体 AMPAR: α-amino-3-hydroxy-5-methyl-4-isoxazole-propionic acid receptor a-氨基 -3-羟基-5-甲基-异恶唑丙酸受体 PSD: Postsynaptic density 突触后致密带 Sol: Solitary nucleus: 孤束核 PBS: Phosphate Buffered Saline 磷酸盐缓冲液 EP: Microcentrifuge tube 微型离心管 AP: Ammonium persulphate 过硫酸铵 TEMED: N,N,N,N-Tetramethylethylenediamine N,N,N,N-四甲基乙二胺 PVDF: polyvinylidene fluoride聚偏二氟乙烯膜 TBS-T: Tris Buffered Saline - Tween20 Tris缓冲盐-吐温溶液 GluR1: Glutamate Receptor 1 谷氨酸受体1 HRP: Horseradish Peroxidase 辣根过氧化物酶 EDTA: Ethylenediaminetetraacetic acid 乙二胺四乙酸 NR1: NMDA receptor 1 NR2A: NMDA receptor 2A NR2B: NMDA receptor 2B 5x Loading Buffer: 250mM tris-Hcl(pH6.8), 10%SDS, 50%甘油, 0.5%溴芬兰, 5% 2-巯基乙醇 0.32M的蔗糖缓冲液：10 mM sucrose, 10 mM Hepes (pH 7.4) Radioimmunoprecipitation assay buffer: 50 mM tris-HCl (pH 7.6), 150 mM NaCl, 1 mM EDTA, 1% NP-40, 0.1% SDS, 1 mM dithiothreitol (DTT), 0.5% sodium deoxycholate. 4 mM Hepes buffer: 4 mM Hepes, 1 mM EDTA (pH 7.4) Buffer A: 20 mM Hepes, 100 mM NaCl, 0.5% Triton X-100 (pH 7.2) Buffer B: 20 mM Hepes, 0.15 mM NaCl, 1% Triton X-100, 1% deoxycholic acid, 1% SDS, 1 mM DTT (pH 7.5) Western-blot实验记录 动物分组：假手术组（Sham），心绞痛手术组（CMI） 实验目的：观察Sham和CMI大鼠Sol内谷氨酸受体（ 实验步骤： 蛋白提取 1．迅速处死动物并用灭菌预冷工具取脑，准确分离和收集大鼠双侧孤束核（Sol）组织，置于冰上操作（4℃）； 2．预冷PBS或生理盐水冲洗组织，放入EP管中称重，可放置-80℃保存半年以上； 3．将组织剪切成细小碎片； 4．溶解裂解液、混匀取适量的裂解液，在使用前数分钟加入RIPA和蛋白酶抑制剂组成的蛋白裂解液； 5．按照20 mg组织/200 μL裂解液的比例加入适量裂解液（如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液）； 6．用超声裂解器裂解数次至蛋白组织充分破碎，冰上放置充分裂解2min； 7．4℃，12000g 离心20 min，吸取上清转移至新的干净预冷EP管中，丢弃沉淀；（提前将离心机预冷至4℃） 8．蛋白定量： BCA法（Pierce BCA蛋白分析试剂盒）: 方法：按说明书稀释BSA标准品； 2. 准备BCA工作试剂； 3. 各吸取25μl标准品或者待测样品加入96孔板（working range= 2-2000 μg/ml）； 4. 每孔加入200 μl的WR并混匀； 5. 加盖子37℃孵育30 min； 6. 冷却至室温； 7. 酶标仪读取吸光度值（540-590nm）； 8. 各待测样品及标准品A562减去Blank组平均A562； 9. 用校正后的A562制作标准曲线，横坐标各标准品，纵坐标吸光度值，根据标准曲线确定每个样品的浓度。 9. 根据BCA法测得的蛋白浓度进一步将各样本的终浓度调至相同，为10μg/10μl； 10. 加入适量5x Loading Buffer，混匀后沸水浴5min，冷却至室温即可进行电泳分析或者放置-80℃保存，短期4℃保存即可。 配胶 1. 安装玻璃板 所用玻璃板需要仔细洗净，烤