七年制实验课01加强免疫.ppt

抗原进入机体可刺激免疫细胞发生何种反应？ Ag APC Th1 Tc B Ab PMN NK Th2 Complement Target cells MHC CK MHC CK CKs CKs 吞噬细胞：吞噬功能 NK：细胞毒试验 天然免疫系统细胞功能可通过何种实验方法进行检测？ 沉淀反应 凝集反应 免疫标记技术 体液免疫产生的抗体可通过何种实验方法进行检测？ 淋巴细胞转化试验 细胞毒实验 结核菌素试验 细胞免疫可用何实验方法测定？ 建立系统实验体系 免疫抑制模型的建立及其免疫功能检测： 取脾/胸腺—检测细胞增殖功能—淋巴细胞转化试验（细胞免疫） 取血—测定抗体效价—双向琼脂扩散试验（体液免疫） 取血—测定抗体效价—酶联免疫吸附试验（ELISA）（体液免疫） 取腹腔液—检测吞噬细胞功能—吞噬实验（天然免疫） OVA M Th1 Tc B Ab Th2 抗原进入机体可刺激免疫细胞发生何种反应？ MHC CK MHC CK CKs CKs 淋巴细胞转化试验 双向免疫扩散试验 酶联免疫吸附试验 吞噬试验 免疫抑制组小鼠 吞噬细胞功能 细胞免疫功能 体液免疫功能 酶联免疫吸附试验 双向免疫扩散试验 淋巴细胞转化试验 小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞试验 天然免疫功能 获得免疫功能 对照组小鼠 动物模型制备 初次免疫：OVA-AL(OH)3 （0.4ml/只） Day1 CTX ：100mg/kg day8、10、12、14 NS day8、10、12、14 加强免疫：NS （0.4ml/只） day15 加强免疫： OVA-AL(OH)3 （0.4ml/只） day15 免疫功能检测 Day22 初次免疫：NS（0.4ml/只） day1 免疫佐剂 是一些先于抗原或同时与抗原混合注射动物，可增强抗原的免疫原性，即起辅佐抗原作用的物质。 主要佐剂有： * 油性乳剂：弗氏佐剂 * 无机化合物：氢氧化铝 * 微生物及其产物：细菌内毒素 * 脂质体 * 其他：细胞因子等 AL(OH)3佐剂的制备 1. KAL(SO4)2.12H2O(12g)+蒸馏水（144ml） NaOH（2.4g）+蒸馏水（60ml） 2. 将上述NaOH溶液缓慢加入KAL(SO4)2溶液中，边加边混匀。 3. 离心（1500rpm，10min）后去除上清液。 4. 生理盐水洗涤沉淀2次，去除上清液。 5.加生理盐水72ml制成氢氧化铝凝胶佐剂。 取等体积的卵清蛋白（OVA ，2mg/ml)和氢氧化铝胶体混合。 免疫抗原的制备 实验操作 动物免疫 （加强免疫） 实验分组及材料 动物： 小鼠4只/组 对照小鼠:NS-NS OVA-NS 免疫抑制小鼠:NS-CTX OVA-CTX 器材： 1ml注射器 2支/组 碘酒、棉签 试剂： 1.盐水（NS） 6ml/室 2.OVA+AL（OH）3 10ml/室 3.5%苦味酸 20ml/室 分组： 每组8人 实验步骤 注射生理盐水（NS）： 先用碘酒消毒小鼠头颈部，然后用1ml注射器吸取生理盐水0.4ml，在头颈部皮下注射生理盐水0.2ml，分3点注射；剩余的0.2ml进行腹腔注射。 注射OVA： 先用碘酒消毒小鼠头颈部，将(OVA+ AL(OH)3)混合物0.4ml吸入1ml注射器中，注射方法同上。 注意事项 避免注射器伤人。 同一注射器先注射生理盐水，再注射抗原（OVA）。 注射完毕用棉签蘸取苦味酸给小鼠做好标记，标记方法见后页。 将注射器盖好针帽，放在指定位置。 小鼠标记 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 实验步骤 注射生理盐水（NS）： 先用碘酒消毒小鼠头颈部，然后用1ml注射器吸取生理盐水0.4ml，在头颈部皮下注射生理盐水0.2ml，分3点注射；剩余的0.2ml进行腹腔注射。 注射OVA： 先用碘酒消毒小鼠头颈部，将(OVA+ AL(OH)3)混合物0.4ml吸入1ml注射器中，注射方法同上。 * * LOGO